醫(yī)科利昊公司提供基因敲除小鼠服務(wù)、轉(zhuǎn)基因小鼠和基因打靶技術(shù)服務(wù),基因體內(nèi)功能研究提供穩(wěn)定可靠的技術(shù)平臺(tái)
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第二步,從灰色小鼠胚泡中分離胚胎干細(xì)胞,在體外進(jìn)行培養(yǎng)。
第三步,用同源重組載體轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞,用含有新霉素和更昔韋洛的培養(yǎng)基篩選發(fā)生了同源重組的細(xì)胞。
第四步,將篩選得到的胚胎干細(xì)胞植入白色小鼠的早期胚胎(胚泡時(shí)期)中。
第五步,將上述胚胎植入假孕母鼠(白色)子宮中。
第六步,在母鼠所產(chǎn)的小鼠中,有一些是正常的白色,另一些則是嵌合體灰白相間的小鼠。這些嵌合體小鼠的細(xì)胞一部分起源于白色皮毛的胚泡細(xì)胞,另一部分則起源于重組的胚胎干細(xì)胞。起源于重組胚胎干細(xì)胞的皮毛顯示出灰色斑塊,很好辨認(rèn)。
第七步,嵌合體小鼠與野生型白色小鼠進(jìn)行雜交,如果嵌合體小鼠的生殖細(xì)胞恰好是起源于重組胚胎干細(xì)胞,那么其子代小鼠就都應(yīng)該呈現(xiàn)灰色。而這些灰色小鼠的所有細(xì)胞都是雜合體。
第八步,雜合體灰色小鼠(+/H)之間進(jìn)行雜交,得到灰色和白色的子代。從灰色子代中篩選出純合小鼠(H/H),其一對(duì)同源染色體上的等位基因都失活,此純合小鼠即為 “基因敲除小鼠構(gòu)建”。
我們有開(kāi)發(fā)的基因敲除小鼠構(gòu)建APOE(動(dòng)脈硬化研究),
PEPT(白內(nèi)障研究)
Shh+/- 基因敲除小鼠構(gòu)建等小鼠: Shh(Sonic hedgehog)基因在脊椎動(dòng)物胚胎組織形成中起著重要的作用,包括大腦、脊椎、中軸骨骼和四肢的形成。基因缺失的胚胎早期可以觀察到中間結(jié)構(gòu)如脊索和地板的形成和維持的影響,晚期可以觀察到遠(yuǎn)肢結(jié)構(gòu)的缺失以及獨(dú)眼,腹部細(xì)胞包括神經(jīng)管的缺失、脊柱和許多肋骨的缺失。Shh蛋白被證實(shí)是脊椎動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中組織形成所必須的胞外信號(hào)。