SNP分型－Taqman

分型原理：
該技術(shù)是由美國(guó)ABI公司研發(fā)的SNP分型技術(shù)，其技術(shù)原理如下簡(jiǎn)介。PCR 反應(yīng)時(shí)，加入一對(duì)兩端有不同熒光標(biāo)記的特異探針來(lái)識(shí)別不同的等位基因（allele1和allele2），5’端為報(bào)告熒光基團(tuán)（reporter），3’端為淬滅熒光基團(tuán) (quencher)。PCR過(guò)程中，兩個(gè)探針能與正向引物和反向引物之間的互補(bǔ)序列特異退火結(jié)合。當(dāng)探針以完整形式存在時(shí)，由于能量共振轉(zhuǎn)移，熒光基團(tuán)只發(fā)出微弱熒光。特異的探針與相應(yīng)的等位基因雜合后，DNA聚合酶發(fā)揮5’到3’外切酶活性，把報(bào)告熒光基團(tuán)切割下來(lái)，脫離了3’端淬滅熒光基團(tuán)的淬滅作用 (quench)，從而發(fā)出熒光。兩個(gè)探針的5’端標(biāo)有不同的熒光 (FAM或VIC)，3’端標(biāo)有MGB 淬滅基團(tuán)結(jié)合體。根據(jù)檢測(cè)到的不同熒光，可以判斷相應(yīng)的樣本的SNP 等位基因型。
整個(gè)技術(shù)的示意圖如下：

方法特點(diǎn)：
1）該技術(shù)操作簡(jiǎn)單快速，特別適合少量位點(diǎn)大量樣本（幾千個(gè)）的分型項(xiàng)目；
2）探針訂購(gòu)時(shí)間長(zhǎng)（2－3個(gè)月）；
3）不適合少量樣本（幾十個(gè)）多位點(diǎn)分型, 特別是頻率偏低的位點(diǎn)；

檢測(cè)實(shí)例：