蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容：多肽、蛋白質(zhì)的電噴霧質(zhì)譜分子量測(cè)定以及天然產(chǎn)物、生物大分子、有機(jī)分子的質(zhì)譜測(cè)試和數(shù)據(jù)分析。按樣品類型分具體如下：

膠內(nèi)酶解樣品：
樣品類型：SDS-PAGE膠條，2-DE 點(diǎn)膠塊
肽段制備：脫色 還原 烷基化 酶解 肽段提取和C18柱脫鹽純化
蛋白鑒定：nanoflow LC-MS/MS；300 µm ID C18RPC trap columns, 75µm ID×15cm C18 pepmep 100A. 流動(dòng)相：A 0.1%甲酸 B 84% 乙腈 0.1%甲酸；LTQ或Orbitrap。
數(shù)據(jù)檢索：SEQUEST軟件，特殊物種請(qǐng)?zhí)峁┑鞍讛?shù)據(jù)庫(kù)。

酶解后蛋白樣品：
樣品類型：酶解后溶液肽段或凍干肽段
蛋白鑒定：nanoflow LC-MS/MS；300 µm ID C18RPC trap columns, 75µm ID×15cm C18 pepmep 100A. 流動(dòng)相：A 0.1%甲酸 B 84% 乙腈 0.1%甲酸；LTQ或Qrbitrap。
數(shù)據(jù)檢索：SEQUEST軟件，特殊物種請(qǐng)?zhí)峁┑鞍讛?shù)據(jù)庫(kù)。

總蛋白酶解：
樣品類型：蛋白溶液或蛋白凍干粉
肽段制備：溶液內(nèi)全蛋白酶解，還原 烷基化 酶解 肽段提取和C18柱脫鹽純化
蛋白鑒定：nanoflow LC-MS/MS；300 µm ID C18RPC trap columns, 75µm ID×15cm C18 pepmep 100A. 流動(dòng)相：A 0.1%甲酸；B 84%乙腈 0.1%甲酸；LTQ或Qrbitrap。
數(shù)據(jù)檢索：SEQUEST軟件，特殊物種請(qǐng)?zhí)峁┑鞍讛?shù)據(jù)庫(kù)。

送檢樣品要求:

• 至少提供5-10pmol樣本量；如果是干粉，提供10ug，如果是溶液，請(qǐng)?zhí)峁﹗g/ul的濃度，體積約30ul。若提供蛋白電泳膠條，請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)蛋白染色圖像照片；送樣時(shí)請(qǐng)?jiān)跇颖咎峤槐砀裰凶⒚鳂悠返钠访�、�?lái)源、溶劑、濃度、目標(biāo)分子量、聯(lián)系方式，以及樣品是否需要返還等。
• 樣品盡量不含無(wú)機(jī)酸堿、鹽、離子表面活性劑、去垢劑及難揮發(fā)性鹽。如果在樣本提取過(guò)程中使用高鹽、去污劑等化學(xué)試劑，請(qǐng)使Pierce PepClean C-18 Spin Columns (Cat. 89873)純化多肽。
• 酶解過(guò)程中所使用DTT可于-20℃冰凍保藏半年；碘乙酰胺(IAA)現(xiàn)用現(xiàn)配,不可重復(fù)使用；溶液配制要用Milli-Q級(jí)別的水配制；操作過(guò)程中要用進(jìn)口無(wú)蛋白槍頭和離心管；操作過(guò)程勿帶乳膠手套，可用PE手套；多肽樣品制備好后，可于4℃短期保存3-7天，-20℃保存一個(gè)月
• 未知種屬請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，不提供全新蛋白測(cè)序(De novo sequencing)服務(wù)。
• 每周五、周六為對(duì)外服務(wù)時(shí)間，可跑樣本約26個(gè)。每個(gè)樣本機(jī)時(shí)兩個(gè)小時(shí)，數(shù)據(jù)庫(kù)檢索按每個(gè)樣本復(fù)雜程度由30分鐘至8小時(shí)不等。收到樣本的第二周周五出鑒定結(jié)果報(bào)告。如果質(zhì)譜儀忙碌，報(bào)告時(shí)間順延。
• 可按要求提供DVD數(shù)據(jù)刻錄，本實(shí)驗(yàn)中心不負(fù)責(zé)保留數(shù)據(jù)。