基因敲除小鼠構(gòu)建技術(shù)服務(wù) 基因敲除小鼠模型建立技術(shù)服務(wù) 基因敲除小鼠價格優(yōu)惠
基因敲除小鼠利用基因打靶技術(shù)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物的程序一般為：(1) 構(gòu)建基因打靶載體; (2) 將基因打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法) 導(dǎo)入同源的胚胎干細(xì)胞中，使外源DNA 與胚胎干細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組,將打靶載體中的DNA 序列整合到內(nèi)源基因組中從而得以表達(dá); (3) 篩選發(fā)生同源重組的陽性克隆，通過顯微注射或者胚胎凝集的方法將經(jīng)過遺傳修飾的ES細(xì)胞引入受體胚胎內(nèi)制作嵌合體小鼠，在生物活體中研究特定基因的功能�；蚯贸∈笫沟醚芯空邆兡軌蛴^察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改變，從而推斷出特定基因的作用。
基因敲除小鼠基因打靶的原則是, 外源DNA 片段含有與目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列, 同源重組就發(fā)生在這兩個序列之間�；蚯贸∈笸庠碊NA 序列的定位整合有兩種方式，即插入型(又稱O 型) 和置換型(又稱8 型)。與此相對應(yīng), 打靶載體可分為兩類: 插入型載體和置換型載體。
基因敲除小鼠第一步，胚泡時期發(fā)育胚胎的分離。此胚胎來源于灰色品系的小鼠。
基因敲除小鼠第二步，從灰色小鼠胚泡中分離胚胎干細(xì)胞，在體外進(jìn)行培養(yǎng)。
基因敲除小鼠第三步，用同源重組載體轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞，用含有新霉素和更昔韋洛的培養(yǎng)基篩選發(fā)生了同源重組的細(xì)胞。
基因敲除小鼠第四步，將篩選得到的胚胎干細(xì)胞植入白色小鼠的早期胚胎（胚泡時期）中。
基因敲除小鼠第五步，將上述胚胎植入假孕母鼠（白色）子宮中。
基因敲除小鼠第六步，在母鼠所產(chǎn)的小鼠中，有一些是正常的白色，另一些則是嵌合體灰白相間的小鼠。這些嵌合體小鼠的細(xì)胞一部分起源于白色皮毛的胚泡細(xì)胞，另一部分則起源于重組的胚胎干細(xì)胞。起源于重組胚胎干細(xì)胞的皮毛顯示出灰色斑塊，很好辨認(rèn)。
基因敲除小鼠第七步，嵌合體小鼠與野生型白色小鼠進(jìn)行雜交，如果嵌合體小鼠的生殖細(xì)胞恰好是起源于重組胚胎干細(xì)胞，那么其子代小鼠就都應(yīng)該呈現(xiàn)灰色。而這些灰色小鼠的所有細(xì)胞都是雜合體。
基因敲除小鼠第八步，雜合體灰色小鼠（+/H）之間進(jìn)行雜交，得到灰色和白色的子代。從灰色子代中篩選出純合小鼠（H/H），其一對同源染色體上的等位基因都失活，此純合小鼠即為 “基因敲除小鼠構(gòu)建”。
我們有開發(fā)的基因敲除小鼠構(gòu)建APOE(動脈硬化研究),
基因敲除小鼠PEPT(白內(nèi)障研究)
Shh+/- 基因敲除小鼠構(gòu)建等小鼠: Shh（Sonic hedgehog）基因在脊椎動物胚胎組織形成中起著重要的作用，包括大腦、脊椎、中軸骨骼和四肢的形成。基因缺失的胚胎早期可以觀察到中間結(jié)構(gòu)如脊索和地板的形成和維持的影響，晚期可以觀察到遠(yuǎn)肢結(jié)構(gòu)的缺失以及獨(dú)眼，腹部細(xì)胞包括神經(jīng)管的缺失、脊柱和許多肋骨的缺失。基因敲除小鼠Shh蛋白被證實(shí)是脊椎動物發(fā)育過程中組織形成所必須的胞外信號。
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醫(yī)科利昊
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至善健康醫(yī)學(xué)研究院成立于2005年，專業(yè)從事胚胎干細(xì)胞、分子生物醫(yī)學(xué)及基因工程動物模型敲除的技術(shù)研發(fā)、大鼠小鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)及大鼠小鼠海馬側(cè)腦室aav病毒立體定位注射動物實(shí)驗(yàn)服務(wù)，視網(wǎng)膜玻璃體定位注射實(shí)驗(yàn)服務(wù)，分子生物醫(yī)學(xué)科研動物病理生理實(shí)驗(yàn)外包動物病理醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)外包技術(shù)服務(wù)，提供老年老齡sd大鼠及c57老年小鼠，設(shè)有干細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和基因工程動物表型分析實(shí)驗(yàn)室，可提供用于科學(xué)研究和藥物研發(fā)的各類動物胚胎干細(xì)胞和人胚胎干細(xì)胞、成體細(xì)胞、基因工程干細(xì)胞株、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及相關(guān)培養(yǎng)基，同時提供基因敲除小鼠訂購、轉(zhuǎn)基因小鼠訂購、基因沉默小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠等基因工程動物模型的構(gòu)建和基于干細(xì)胞的藥物研發(fā)服務(wù)。
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