DNA 合成

服務(wù)特色          A1  DNA合成                A2   隨機引物

1. 世界上最大的化學(xué)合成DNA專業(yè)公司之一，實力雄厚。現(xiàn)有十多臺高通量DNA合成儀，日產(chǎn)引物達10000條。

2. 完善的銷售網(wǎng)絡(luò)，在全國擁有30多處辦事處和10多個代理公司，在全球設(shè)有40多個國際代理商。

3. 擁有世界范圍的市場，合成的引物大量銷往美國、加拿大、歐洲、日本以及東南亞地區(qū)。

4. 在北京設(shè)有DNA合成分部，使北京的用戶可以更快的拿到產(chǎn)品。

5. 嚴(yán)格的質(zhì)量控制，基本合成級DNA和修飾DNA全部采用質(zhì)譜與電泳雙重QC，2003起每年通過ISO 9001 國際質(zhì)量體系認證。

6. 市場占有率高，占有全國DNA化學(xué)合成市場的70%以上。

7. 品種齊全，除各類修飾堿基、普通引物外，還有HPLC、PAGE和HAP純化以及SiRNA 合成.

 (一)、DNA 合成簡介

(二)、不同純化方法的應(yīng)用

(三)、 HAP方法純化oligo DNA

(四)、 PCR產(chǎn)物測序引物DNA錯誤的原因

 (一)、DNA 合成簡介

    目前，oligo DNA合成一般都采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效、快速偶聯(lián)等優(yōu)點，已在DNA化學(xué)合成中廣泛使用。DNA化學(xué)合成不同于酶促的DNA合成過程從5’?3’方向延伸，而是由3’端開始。具體的反應(yīng)步驟如下：

1、 保護基 (Deblocking)
  用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid，TCA) 脫去連結(jié)在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保護基團DMT (二甲氧基三苯甲基)，獲得游離的5’-羥基端，以供下一步縮合反應(yīng)。
2、活化 (Activation)
  將亞磷酰胺保護的核苷酸單體與四氮唑活化劑混合并進入合成柱，形成亞磷酰胺四唑活性中間體 (其3’-端已被活化，但5’-端仍受DMT保護)，此中間體將與GPG上的已脫保護基的核苷酸發(fā)生縮合反應(yīng)。
3、連接 (Coupling)
  亞磷酰胺四唑活性中間體遇到CPG上已脫保護基的核苷酸時，將與其5’-羥基發(fā)生親合反應(yīng)，縮合并脫去四唑，此時合成的寡核苷酸鏈向前延長一個堿基。
4、封閉 (Capping)
   縮合反應(yīng)后，為了防止連在CPG上的未參與反應(yīng)的5’-羥基在隨后的循環(huán)反應(yīng)中被延伸，常通過乙酰化來封閉此端羥基，一般乙酰化試劑是用乙酸酐和N-甲基咪唑等混合形成的。
5、氧化 (Oxidation)
   縮合反應(yīng)時核苷酸單體是通過亞磷酯鍵與連在CPG上的寡核苷酸連接，而亞磷酯鍵不穩(wěn)定，易被酸、堿水解，此時常用碘的四氫呋喃溶液將亞磷酰轉(zhuǎn)化為磷酸三酯，得到穩(wěn)定的寡核苷酸。

經(jīng)過以上五個步驟后，一個脫氧核苷酸就被連到CPG的核苷酸上，同樣再用三氯乙酸脫去新連上的脫氧核苷酸5’-羥基上的保護基團DMT后，重復(fù)以上的活化、連接、封閉、氧化過程即可得到DNA片段粗品。最后對其進行切割、脫保護基 (一般對A、C堿基采用苯甲�；�保護；G堿基用異丁�；�保護；T堿基不必保護；亞磷酸用腈乙基保護)、純化 (常用的有HAP，PAGE，HPLC，C18，OPC等方法)、定量等合成后處理即可得到符合實驗要求的寡核苷酸片段。HAP方法為本公司專利，它集中了所有純化方法的優(yōu)點，具有多快好省的特點。
固相合成Oligo DNA是在DNA合成儀上進行的。上述方法合成的Oligo在脫去保護基后，目的Oligo純度是極低的，其中含有大量的雜質(zhì)。主要雜質(zhì)有：所脫下的保護基與氨形成的苯甲酸氨和異丁酸氨，腈磷基上脫下的腈乙基，以及合成時產(chǎn)生的短鏈等。以至于粗產(chǎn)