Double Digestion(雙酶切反應(yīng))時(shí)Universal Buffer(通用緩沖液)的使用表

使用二種酶同時(shí)進(jìn)行DNA切斷反應(yīng) (Double Digestion) 時(shí)，為了節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，通常希望在同一反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行。TaKaRa采用Universal Buffer表示系統(tǒng)，并對每種酶表示了在各Universal Buffer中的相對活性。盡管如此，在進(jìn)行Double Digestion時(shí)，有時(shí)還會(huì)難以找到合適的Universal Buffer。
本表以在pUC系列載體的多克隆位點(diǎn)處的各限制酶為核心，顯示了在Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer條件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的 [數(shù)字×] 是指各Universal Buffer的反應(yīng)體系中的最終濃度。TaKaRa銷售產(chǎn)品中添附的Universal Buffer全為10倍濃度的緩沖液。終濃度為0.5×?xí)r反應(yīng)體系中的緩沖液則稀釋至20倍，1×?xí)r稀釋至10倍，2×?xí)r稀釋至5倍進(jìn)行使用。

◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶，在50 μl的反應(yīng)體系中，37℃下反應(yīng)1小時(shí)可以完全降解DNA。
◇ 為防止Star活性的產(chǎn)生，請將反應(yīng)體系中的甘油含量，盡量控制在10%以下。
◇ 根據(jù)DNA的種類，各DNA的立體結(jié)構(gòu)的差別，或當(dāng)限制酶識(shí)別位點(diǎn)鄰接時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生Double Digestion不能順利進(jìn)行的可
能。