質(zhì)粒DNA質(zhì)量如何評(píng)估才可靠？

       質(zhì)粒抽提過(guò)程中有很多步驟會(huì)影響最后的產(chǎn)量和質(zhì)量，那么如何評(píng)估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量呢？

       目前使用分光光度法定量質(zhì)粒DNA和通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)粒DNA產(chǎn)率和質(zhì)量的分析是兩種最常用的方法。

       溶液中的核酸濃度可通過(guò)260 nm的吸光度方便地進(jìn)行計(jì)算。A260的數(shù)值處于0.1至1.0之間時(shí)測(cè)量結(jié)果具有良好的重復(fù)性，但當(dāng)A260數(shù)值小于0.1或大于1.0的時(shí)候，結(jié)果的可重復(fù)性將顯著下降。而且，3.0以上的讀值是無(wú)法使用的，它可能會(huì)潛在導(dǎo)致對(duì)DNA質(zhì)量的低估。因此，為了獲得可靠的DNA分光光度定量結(jié)果，A260的讀值需要處于0.1至1.0之間。當(dāng)檢測(cè)小量DNA時(shí)，使用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行的定量分析可能更為可靠。

       造成較低的產(chǎn)率和質(zhì)量的可能因素有很多。為了確定存在問(wèn)題的環(huán)節(jié)，可于每一純化步驟都保留一小部分樣品，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。

如各個(gè)實(shí)驗(yàn)方案和下列表格中所示，從澄清裂解液（樣本1）、流出液（樣本2）、QC洗滌緩沖液的混合組分（樣本3）和QF/QN緩沖液洗脫產(chǎn)物（樣本4）中各取出部分樣品。使用1倍體積的異丙醇沉淀核酸，并使用70%的乙醇洗滌該沉淀，充分蒸干后重懸于10 µl pH8.0的TE緩沖液中。

表一 瓊脂糖凝膠分析所需樣本體積

在1%的瓊脂糖凝膠*中，對(duì)于各個(gè)質(zhì)粒純化步驟中的對(duì)應(yīng)樣品各加入2 µl進(jìn)行電泳。

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