蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑的取用規(guī)則
瀏覽次數(shù):603 發(fā)布日期:2020-3-2
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蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑的取用規(guī)則:
()試劑不能與手接觸。
(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,*不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,方可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后將瓶放回原處
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)。
蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)步驟
()實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(0mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-0 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:)抽提(0,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:)抽提(0,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入/4V體積0M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)0,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:)抽提兩次,異戊醇(24:)抽提次(0,000rpm,4℃,5min)
(0)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
()2,000rpm,4℃離心20 min
(2)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(3)加200ul的DEPC處理水溶解
(4)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))