植物組織提取高質(zhì)量的DNA五大方法詳解

      

 

       蛋白質(zhì)純化是旨在從細胞，組織或整個生物體中分離出一種或幾種蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)純化對于表征目的蛋白質(zhì)的功能，結(jié)構(gòu)和相互作用至關重要。蛋白質(zhì)分離與提取是生命科學研究基礎中的基礎。植物細胞由于存在細胞壁的結(jié)構(gòu)，因此比動物細胞蛋白的提取相對復雜。

 

 

 

       提取植物中的DNA對植物基因工程，植物生理、病理研究等方面具有重要作用。不同植物的核酸結(jié)合蛋白的情況各不相同，因而需要采取不同的提取方法。植物中次生代謝產(chǎn)物多酚類化合物會影響DNA降解，同時多糖的污染也會影響植物DNA純度。因此從富含多酚和多糖的植物組織中分離獲得高質(zhì)量的基因組DNA難度較大。一般常用方法如下：

 

       一，CTAB 法

 

       CTAB法即十六烷基三乙基澳化按法，CTAB是一種陽離子去污劑，它能與核酸形成復合物，這些復合物在低鹽溶液中會因溶解度的降低而沉淀，而在高鹽溶液中可解離，從而使DNA和多糖分開，再用乙醇沉淀DNA除去CTAB。在該法中使用的聚維酮 (PVP)與多酚結(jié)合形成復合物，從而可有效避免多酚類化合物影響DNA降解。

 

       二，SDS 法

 

       相比于CTAB，SDS法更加方便簡單。近年來科研者們提出了利用SDSTris-Cl-EDTA直接裂解細胞使其釋放出DNA的方法，后續(xù)的DNA純化過程中通常采用酚/氯仿處理，但對于植物DNA純化不是一個很好的選擇，因為酚的使用可降低DNA的提取效率和純度。實驗證明，若采用較大的離心力和較長的離心時間，然后用氯仿一異戊醇代替酚來去除變性蛋白質(zhì)，可以克服由于酚的摻入及殘留對以后酶切帶來的困難。

 

       三，氯化節(jié)法

 

       氯化節(jié)法的提取獲得率較高。原因可能為氯化節(jié)不僅與植物細胞壁上的多糖經(jīng)基反應生成醚，而且與細胞液中多糖物質(zhì)反應破壞糖鏈，有利于DNA的釋放和提純。

       

       四，高鹽低pH法

 

       高鹽低pH法是指以無機鹽和異丙烯為提純試劑提取DNA的方法。通常采用的無機鹽為低pH的醋酸鉀，用來沉淀蛋白質(zhì)。該方法方便省時，所需樣品量少。

 

       五，果膠酶法

 

       利用果膠酶對植物破碎細胞進行抽提的一種技術。

 

 

       如何提取植物組織中的可溶性蛋白質(zhì)和代謝物？如何更快更簡便的獲得植物PCR擴增所需的模板？艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學領域解決方案供應商，為您推薦植物組織提取試劑盒和升級版植物快速PCR試劑盒。

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	規(guī)格	說明
Plant Tissue Extraction Kit	K296	50次	提取植物可溶性蛋白質(zhì)和代謝物，用于各種下游應用，例如蛋白質(zhì)印跡，2D凝膠電泳，免疫沉淀測定，酶活性測定和代謝物定量等。
PlantAdvance™ PCR Kit	M1144	25次	在專利提取緩沖液中將一小片植物樣品“渦旋-煮沸-渦旋”只需15分鐘，即可獲得可用于PCR的模板。gDNA提取過程消除了常規(guī)植物組織液氮冷凍，機械破壞，有機提取，柱DNA純化或酒精沉淀等。

       植物組織提取試劑盒特色與優(yōu)勢：

 

       1.從各種干燥和新鮮植物組織中提取可溶性蛋白以及其他生物分子和代謝物的有效方法；

       2.無需使用液氮，操作快速簡單；

       3.易于使用，可確保恒定的蛋白質(zhì)產(chǎn)量〜2-9 mg / ml（取決于樣品類型）。

 

       廠家驗證結(jié)果圖：

 

 

    （A）植物組織裂解物的SDS-PAGE：各25μl生菜（20μg，泳道2），青椒（20μg，泳道3），鱷梨（40μg，泳道4）和蘭花葉（10μg，泳道5）加載到4-20％ SDS-PAGE上，并在電泳后用考馬斯亮蘭染色。按照試劑盒方案制備植物裂解物。泳道1：Marker。

 

    （B）使用PicoProbe™G6P熒光測定試劑盒（Cat＃K687）測量蘭花葉裂解液（5μg）中的葡萄糖-6-磷酸。

 

     （C）使用PicoProbe™G6PDH活性測定試劑盒（Cat＃K751）測量蘭花葉裂解物（0.6μg）中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的活性。

 

       升級版植物快速PCR試劑盒特色與優(yōu)勢：

 

       1.無需耗時的DNA純化步驟；

       2. 只需要少量樣品；
       3.適用于各種植物樣品的簡單通用protocol；

       4.應用：植物PCR，基因/轉(zhuǎn)基因檢測，植物樣品基因分型。

 

       升級版植物快速PCR試劑盒的使用流程圖：

 

 

       廠家對靈敏度的驗證結(jié)果圖：

 

 

從各種葉片樣品中擴增出700 bp的植物28S。

 

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