常見細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)原理步驟和常見問題解答

 

小 M 敲黑板�。∨笥褌�，是不是忘了年前我們分享的實(shí)驗(yàn)寶典了！不都告訴你們細(xì)胞轉(zhuǎn)染的一大法寶了嗎！趕緊搬好小板凳跟著我一起復(fù)習(xí)一下。

 

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中較為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，主要指將 DNA/RNA 導(dǎo)入真核細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法五花八門，常見的可分為化學(xué)法、物理法和病毒法。

 

先前小 M 已經(jīng)介紹過各種轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)缺點(diǎn)了 (見 “六合心法” 有三式~)，在傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法 (如磷酸鈣法、電穿孔法、病毒法等) 轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞毒性大、重復(fù)性差的情況下，以 Lipo3000 為主的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脫穎而出，一度成為轉(zhuǎn)染界的“熱門選手”。但是它貴�。∩砸徊簧�，人財(cái)兩空，哦不，是細(xì)胞和試劑都沒了，豈是一個(gè)慘字了得。

 

圖 1. 常見轉(zhuǎn)染技術(shù)原理

 

想要高效又價(jià)美的轉(zhuǎn)染試劑嗎？

 

MCE 重磅推出的高性價(jià)比 PolyFast Transfection Reagent(HY-K1014)，宿主范圍廣、轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小，最最最關(guān)鍵的是價(jià)格只有 Lipo3000 五分之一�。�！Lipo3000 五分之一！�。�Lipo3000 五分之一�。�！嘿嘿，重要的事情說三遍。

 

圖 2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

 

   小白: PolyFast Transfection Reagent 也是屬于陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑嗎？ 
小M: 不是哦！PolyFast Transfection Reagent 屬于陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，在確保高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，對細(xì)胞毒性更小！

 小白: 那可以使用有血清的培養(yǎng)基嗎？

 小M: 可以使用有血清的培養(yǎng)基。但對于一些難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，建議剛開始轉(zhuǎn)染前使用無血清培養(yǎng)基，至少轉(zhuǎn)染一小時(shí)后再換成有血清培養(yǎng)基。

 小白: 那培養(yǎng)基中含有抗生素會(huì)對細(xì)胞轉(zhuǎn)染有影響嗎？

 小M: 可添加抗生素。但是為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議剛開始轉(zhuǎn)染前使用無抗生素培養(yǎng)基，后續(xù)可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)體系添加相應(yīng)抗生素。

 小白: 那在具體的操作過程中，DNA 和 PolyFast Transfection Reagent 的比例是多少呢？

 小M: 我們推薦的 DNA (μg) 和 PolyFast Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。最佳轉(zhuǎn)染條件因不同的細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件而有所區(qū)別，轉(zhuǎn)染前，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。

 小M: 此外，除了轉(zhuǎn)染質(zhì)粒 DNA，我們的轉(zhuǎn)染試劑也適用于 RNA 轉(zhuǎn)染~

 小白: 那可以同時(shí)轉(zhuǎn)染兩個(gè)質(zhì)粒嗎？

 小M: 當(dāng)然也可以啦！共轉(zhuǎn)的話，建議總 DNA 及 PolyFast Transfection Reagent 的用量同步提高兩倍，再根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果摸索兩個(gè)質(zhì)粒的使用比例。

 小M: 就是如此優(yōu)秀，小 M 帶大家一起來看下我們的測試數(shù)據(jù)吧。  

 

MCE PolyFast Transfection Reagent 對多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，也可轉(zhuǎn)染一些原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

 

下表列舉了本產(chǎn)品適用的部分細(xì)胞系。

 

圖 3. 適用細(xì)胞系

 

圖 4. HEK293 細(xì)胞中和 BHK-21 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率比較

 

圖 5. 轉(zhuǎn)染效率比較和細(xì)胞活力測定

左：293 T 細(xì)胞，pcDNA3-C-REP 質(zhì)粒 (2.5 μg)；PolyFast Transfection Reagent (7.5 μL)；右：Huh-7 細(xì)胞活力測定

 

 

 

  看了這么多，是不是心動(dòng)啦？有了 MCE PolyFast Transfection Reagent，老板再也不用擔(dān)心我做不好細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)啦！