StrataClean™樹脂進(jìn)行DNA純化和蛋白濃縮的實(shí)驗(yàn)步驟

StrataClean™樹脂是一種專利無毒、不可燃的羥基化二氧化硅顆粒漿液，可用于純化 DNA，或?qū)⑾♂尩牡鞍踪|(zhì)混合物濃縮。 使用StrataClean™ 樹脂純化DNA無需進(jìn)行苯酚:氯仿提取（這兩種物質(zhì)劇毒且可燃）， 提取的 DNA 可直接用于測(cè)序，或沉淀用于連接和限制性酶解等操作。使用StrataClean™樹脂純化濃縮蛋白，不需要像傳統(tǒng)的方法那樣沉淀、透析和超濾等操作；只需要將樹脂加入樣品混和并簡(jiǎn)單離心即可。與StrataClean™樹脂結(jié)合的即為已經(jīng)濃縮的蛋白，可以用于下游的SDS-PAGE和二維凝膠電泳。
 

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

方法無毒、安全且簡(jiǎn)單易用

StrataClean 樹脂是用于 DNA 純化的無酚技術(shù)。固相硅膠型樹脂具有羥基，以與酚羥基相同的方式與蛋白質(zhì)反應(yīng)。采用樹脂處理可將 DNA 與所有限制性內(nèi)切酶和某些修飾酶分離。樹脂是無毒、不可燃，實(shí)驗(yàn)更加安全

實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短

由于 StrataClean 樹脂具有與苯酚相似的特性，因此在中性 pH 下對(duì)蛋白質(zhì)具有高親和力，而對(duì)核酸則具有較低親和力。該樹脂的硅膠顆粒為不溶性，蛋白質(zhì)通過與 StrataClean 樹脂結(jié)合可在 5 分鐘內(nèi)完全提取。無蛋白質(zhì)的 DNA 可有效用于下游應(yīng)用，例如克隆、PCR、序列分析和 Southern 印跡分析。

 

使用方法

DNA純化（以鼠尾DNA提取為例）

StrataClean™樹脂可以代替苯酚：氯仿從鼠尾中純化小鼠基因組DNA。所得到的DNA適合用于雜交。

 

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、準(zhǔn)備鼠尾（6mm左右長(zhǎng)度）在750μl 1X STE，11% SDS and 25 μl of 10 mg/ml 蛋白酶K ，5555°C 消化三小時(shí)，或37°C 過夜消化。

2、消化后，加入30μl StrataClean™樹脂，顛倒混勻，然后在離心機(jī)中14,000 rpm 離心10分鐘。

3、提取上清液，并轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的試管中。加入750 μl冰異丙醇，倒混合�？梢钥吹揭粋�(gè)DNA“毛球”形成。

4、將DNA放在14000rpm的離心機(jī)中離心4分鐘，吸出上清液，讓DNA晾干。

5、用250 μl TE緩沖液（10 mM Tris-HCl；1 mM EDTA，pH 7.8）重懸DNA，以備用

 

蛋白濃縮（以提取限制性內(nèi)切酶和改性酶為例）

StrataClean™樹脂可以用于提取所有限制性內(nèi)切酶和一些改性酶。如果樣品符合以下規(guī)格，則可獲得最佳結(jié)果：

• 最大反應(yīng)體積：250μl
• 最大（最終）酶濃度10%(vol/vol)
• 最大鹽濃度150 mM
• 若體積超過250μl，使用10%的StrataClean™樹脂

StrataClean™樹脂用量，可參考下表

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.使StrataClean™樹脂充分渦旋。

2.使用無酶的槍頭，將StrataClean™樹脂加入反應(yīng)體系，渦旋15秒。

3.在室溫下孵育1分鐘。

4.在2000×g離心1分鐘（可以大于1分鐘）。

5.使用無酶槍頭，小心地將含有DNA清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中，請(qǐng)注意不要吸取到底部的StrataClean™樹脂

6.重復(fù)步驟1-5。

7.使用1X LDS 緩沖液 添加DTT 在95℃從StrataClean™樹脂中講蛋白洗脫備用

 

高分文獻(xiàn)精選：

1.Silwal P, Kim Y J, Lee Y J, et al. Chemical mimetics of the N-degron pathway alleviate systemic inflammation by activating mitophagy and immunometabolic remodeling[J]. Experimental & Molecular Medicine 1-14 (2023)

2.Stidham S, Villareal V, Chellappa V, et al. Aptamer based point of care diagnostic for the detection of food allergens[J]. Scientific Reports 12(1): 1303 (2022).

3.Zhou, H., Stein, C.B., Shafiq, T.A. et al. Rixosomal RNA degradation contributes to silencing of Polycomb target genes. Nature 604, 167–174 (2022).

4.Peng, M., Curry, S.M., Liu, Y. et al. The ex vivo human translaminar autonomous system to study spaceflight associated neuro-ocular syndrome pathogenesis. npj Microgravity 8, 44 (2022). 

5.Koch H, Dürwald A, Schweder T, et al. Biphasic cellular adaptations and ecological implications of Alteromonas macleodii degrading a mixture of algal polysaccharides[J]. The ISME journal 13(1): 92-103 (2019).