全能核酸酶使用常見問題答疑

Q1：核酸酶適用于哪些領(lǐng)域的哪些環(huán)節(jié)？
A1：核酸酶主要用于去除下游純化中的HCD，降低粘度。應(yīng)用領(lǐng)域主要集中在基因治療、細(xì)胞治療的病毒載體生產(chǎn)，使用環(huán)節(jié)是下游純化，UFDF環(huán)節(jié)之前。
 
Q2：核酸酶的使用濃度是多少？
A2：一般的病毒載體純化使用濃度是20-50 U/ml，溶瘤病毒的話使用濃度會(huì)高一些，可能會(huì)到100-150 U/ml。
 
Q3：蛋白不溶，需要在變性條件下純化，pannarase核酸酶可以在尿素環(huán)境下消化核酸么？
A3：核酸酶在6M尿素條件下活性先增加，當(dāng)尿素濃度到7M時(shí)，核酸酶會(huì)在15min后變性失活。因此在這個(gè)濃度下可適當(dāng)提高核酸酶添加量補(bǔ)償活性損失。
 
Q4：當(dāng)反應(yīng)溫度低于37℃，如何保證pannnarase的消化效果？
A4：體系固定的條件下，核酸酶的消化效果取決于酶的用量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。溫度較低時(shí)，建議延長酶解時(shí)間，避免加入過多核酸酶造成殘留過高。
 
Q5：怎樣滅活pannarase核酸酶？如何去除？
A5：使用EDTA螯合金屬離子可以可逆的抑制核酸酶的活性，極端條件會(huì)造成失活，如100mM NaOH，70℃處理30min等。核酸酶可采用陰離子交換柱從產(chǎn)物中分離出去。
 
Q6：產(chǎn)品應(yīng)如何進(jìn)行稀釋？
A6：正確稀釋比例是1：1000~1：20000，原儲(chǔ)存液中含有50%甘油，酶液不會(huì)在-20℃凍結(jié)，但在不含甘油的緩沖稀釋液中的酶需要盡快用掉，不推薦凍結(jié)后再次使用。
 
Q7:核酸酶的去除方法有哪些？
A7:切向流過濾、色譜法、濾器、陰離子層析等。
 
Q8:細(xì)菌或細(xì)胞裂解液里的核酸酶應(yīng)該如何去除？
A8:隨著工藝去除雜蛋白時(shí)會(huì)一并去除，不用特意純化 。
 
Q9:Pannarase耐高鹽核酸酶的來源與特點(diǎn)？
A9: Pannarase耐高鹽核酸酶(EC 3.1.31.1)是一種來源于Staphylococcus aureus的熱穩(wěn)定非特異性核酸內(nèi)切酶（Thermonuclease），具有耐鹽和高溫穩(wěn)定性。

Q10：耐高鹽核酸酶的鹽離子耐受范圍
A10：0-500 mM NaCl均能保持活性15%以上。