Trypelectase重組胰蛋白酶配置、使用等相關(guān)問題解答
細胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，是生命活動最小的組織單位。細胞培養(yǎng)則是生命科學(xué)研究領(lǐng)域“王冠”上的“明珠”。在細胞培養(yǎng)過程中，細胞消化是一項重要的步驟，通過細胞消化可使培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的粘連蛋白被分解掉，讓細胞分散，而且有利于細胞進行營養(yǎng)交換，從而維持細胞的正常生命周期和功能。
最常用的細胞消化液之一是胰蛋白酶，在進行原代培養(yǎng)時可將組織塊消化解離形成細胞懸液，傳代培養(yǎng)時也可將貼壁細胞從瓶壁上消化下來。
逐典重組胰蛋白酶
Trypelectase 重組胰蛋白酶是逐典生物專門為疫苗、病毒載體生產(chǎn)設(shè)計，具有高效、非動物源和高質(zhì)量標準的特點。該胰蛋白酶氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致，由大腸桿菌(E.col) 重組表達生產(chǎn)。在GMP級別環(huán)境中生產(chǎn)的重組胰蛋白酶能高效消化貼壁細胞且不造成傷害，產(chǎn)品質(zhì)量滿足藥典要求。
逐典重組胰蛋白酶特點
1.GMP級生產(chǎn)環(huán)境、符合藥典標準
2.重組生產(chǎn)、不含雜酶
3.批量生產(chǎn)、質(zhì)量穩(wěn)定
4.高純度、高比活
5.非動物源原料
逐典重組胰蛋白酶應(yīng)用場景
組織塊的消化解離和原代細胞的獲取、貼壁細胞的傳代消化和收獲、微載體方法培養(yǎng)的細胞消化和收獲。
實驗數(shù)據(jù)
CT26.WT 和 HEK293FT 細胞消化實驗
CT26WT和HEK293FT在經(jīng)Trypelectase重組胰酶消化3min后解離效果較好，細胞活率顯示對細胞傷害較小，不會影響細胞傳代。
Trypelectase重組豬胰酶對細胞消化過程及傳代24h細胞貼壁圖
逐典重組胰蛋白酶常見問題
Q：逐典重組胰蛋白酶配置是否需要過濾?
A：需要使用0.22μm濾膜除菌過濾，這個在母液配置和工作液（即稀釋后）的配置中都是需要的。
Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品是否是無菌產(chǎn)品？
A：不是無菌產(chǎn)品，產(chǎn)品COA中是微生物限度標準為100CFU，所以在配置使用前需要進行無菌過濾。
Q：逐典重組胰蛋白酶的配置有哪些環(huán)節(jié)？分幾步？
A：重組胰酶從干粉到能直接使用的工作液需要兩大環(huán)節(jié)。第一步：需要配置成低PH的母液，除菌過濾；第二步：再進行中性緩沖液稀釋，過濾除菌后就能直接使用了。
Q：逐典重組胰酶的主要優(yōu)點是那些？
A：非動物來源、GMP環(huán)境生產(chǎn)、高酶活、高穩(wěn)定性。
Q：逐典重組胰酶的建議使用濃度是多少？
A：配置母液的濃度是10 mg/ml，配置工作液濃度是0.5 mg/ml。
Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品如何保存？干粉？母液？工作液？
A：一般來說，我們的干粉產(chǎn)品 -20℃保存 2年沒有問題， 配成母液-20℃保存 1年沒有問題，工作液的話-20℃保存 1-3個月沒有問題，臨時用放在4℃可保存一周內(nèi)，但還是建議客戶現(xiàn)用現(xiàn)配。
Q：消化細胞的胰酶是不是濃度越高越好？
A：不是的，一般來說消化細胞會有一個最佳胰酶濃度，達到最適濃度后濃度升高會傷害細胞。
Q: 細胞消化時間長是不是意味著胰酶產(chǎn)品性能不行？
A: 一般的細胞消化時間3-5min都是很正常的，難消化的細胞10-15min也是存在的。 細胞消化時間長短不能完全決定產(chǎn)品性能，產(chǎn)品的比活、活性、級別、生產(chǎn)技術(shù)、以及質(zhì)量標準等因素都是評判產(chǎn)品性能的條件。
Q: 如何控制胰酶消化時間？
A: 不同細胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細胞的密度有關(guān)。
