腺病毒 IgM ELISA試劑盒使用說明

（德國IBL：RE56581）

 

此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗腺病毒IgM抗體的定性和定量檢測。

腺病毒是人和動物體內(nèi)普遍存在的一種病原體，可分為許不同的血清型。腺病毒是一種常年存在所有人群中的地方性疾病。這種傳染病可以通過空氣傳播，也可通過塵埃傳播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和腸道黏膜，也會感染角膜。它們主要集中于上皮細胞和局部附屬淋巴結(jié)。腺病毒可引起各種已知的呼吸道病毒性疾�。汉粑�道疾病、肺炎、與游泳池相關(guān)的咽結(jié)膜炎高燒和角膜結(jié)膜炎流行病。腺病毒的腸內(nèi)感染主要出現(xiàn)在小于一歲的小孩中。它主要特點是出現(xiàn)流行性急性腸胃炎，通常是由腺病毒40和41引起的。分離腺病毒或血清學(xué)檢測可以檢測是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清學(xué)檢測特別重要，因為它可確定病人是否是急性腺病毒感染，另外它也用于大型流行病學(xué)的調(diào)查研究。ELISA主要測抗六聯(lián)體成分上群特異性決定簇的抗體。建議用于檢測特異性抗體的檢測方法有：血凝抑制和血清中和實驗。由于腺病毒到處都存在以及相關(guān)血清型之間的交叉反應(yīng)，為了確定感染，可使抗體濃度提高4倍或更高的血清轉(zhuǎn)化就很有必要了。在血清學(xué)檢測中，IgG是主要被檢測的抗體。

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔中包被了抗原。用對IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來檢測結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗原。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色強度與IgM特異性抗體的濃度成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。

1)       RF吸附劑

2)       移液器，體積：5；50；100；500 µL

3)       校準(zhǔn)儀

4)       樣品稀釋用試管（1ml）

5)       帶試劑儲器8道移液器

6)       洗滌瓶，自動或半自動洗板機

7)       能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

8)       雙蒸水或去離子水

9)       吸水紙，取樣吸頭和計時器

6.1成分準(zhǔn)備

6.2樣品稀釋

6.3用RF吸附劑處理：

為了避免吸附特異性抗體，應(yīng)當(dāng)避免溫育時間＞15min。

預(yù)處理的樣品可能會是渾濁的。

1)       加100µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4)       在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7)       每孔加TMB底物液100µL。

8)       室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9)       在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時，顏色藍色變成黃色。

10)    加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值。

在半對數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對數(shù)圖或?qū)��?shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實驗結(jié)果。對于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進行計算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實驗前的準(zhǔn)備說明所述對樣品進行稀釋，并重新檢測。

9、結(jié)果判定： ＞ 12 U/ml  為陽性,8 - 12 U/ml  為可疑,＜ 8 U/ml  為陰性

此檢測結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的唯一因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。