DHT 雙氫睪酮 ELISA試劑盒使用說明書

德國IBL原裝進(jìn)口，貨號：DB52021

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此ELISA試劑盒可用于人血清中二氫睪酮的定量檢測。注：僅供體外診斷用。

此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品中的未標(biāo)記抗原和酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合包被板上有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。洗板以除去未結(jié)合的物質(zhì)。洗板后，加入酶底物液。最后加入終止液以終止酶反應(yīng)，并在酶標(biāo)儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中DHT的量成正比。實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)準(zhǔn)品可作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品和質(zhì)控品中DHT的量。

5α-二氫睪酮（DHT）是一種類似于睪酮和雄烯二酮的類固醇激素，屬于雄性激素類。 DHT是一種含19個(gè)碳的類固醇，并具有雄性激素的活性。雄性激素主要由睪丸的萊迪希細(xì)胞分泌。循環(huán)于血液中的雄性激素會(huì)結(jié)合到一些蛋白質(zhì)上，尤其會(huì)結(jié)合到SHBG（性激素結(jié)合蛋白）和清蛋白上。只有極少一部份以未結(jié)合的形式存在于血液中，被稱為游離部份。DHT對SHBG的親和力是睪酮對SHBF親和力的3倍。在男性中，有70％的DHT是由外周睪酮轉(zhuǎn)化而來；而在女性中，大多數(shù)DHT是由雄烯二酮轉(zhuǎn)化而來。肝是抑制雄性激素功能的主要器官。因此，類固醇激素在肝中都會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，人們普遍認(rèn)為這各種結(jié)構(gòu)改變是其生物活性喪失的必要條件。在到達(dá)腎排泄前，此種類固醇會(huì)形成一些代謝產(chǎn)物，而有些類固醇又會(huì)回到血液循環(huán)中。因此，人體內(nèi)的類固醇激素是通過尿液排出體外的。臨床傾向：在克蘭費(fèi)爾特綜合征中，DHT的水平比正常人的要低很多。在先天性多毛癥患者中，有40％以上患者的DHT水平都會(huì)升高。在多囊卵巢患者中，大約35％患者的DHT水平會(huì)升高。成年人的DHT水平比正常老年人的DHT水平要高很多，因此雄性激素在青春期的分泌量會(huì)增加，這樣它就可以促進(jìn)男性第二性征的形成。人們已經(jīng)證實(shí):人睪丸的生精小管可產(chǎn)生DHT。因此，在生精小管受損時(shí)，DHT的生成就會(huì)受阻，從而導(dǎo)致血漿DHT水平降低（例如：生殖細(xì)胞不發(fā)育癥和精子缺乏癥患者）。無睪畸形患者的血漿DHT的水平就非常低。據(jù)報(bào)道：在一些前列腺癌患者中（特別是第四階段），DHT的檢測有益于預(yù)測抗雄性激素治療的治療效果。

進(jìn)行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應(yīng)的標(biāo)記試管中，并待其凝血，離心獲取血清。4℃下可穩(wěn)定存放24個(gè)小時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)過幾天再做，可將樣品凍存-10℃的環(huán)境或更低溫度下。

此檢測系統(tǒng)是一直接檢測系統(tǒng)，不需要進(jìn)行任何樣品預(yù)處理。

1）移液器，50；100；150和300μl

2）取樣吸頭

3）蒸餾水或去離子水

4）搖床

5）酶標(biāo)儀

1）兔抗DHT抗體包被的可拆包被板，即用。內(nèi)含：抗DHT抗體包被的96孔包被板，密封于含干燥劑的包半裝袋中，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。

2）HRP標(biāo)記的DHT酶聯(lián)物，50倍濃縮型，內(nèi)含：HRP標(biāo)記的DHT酶聯(lián)物、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：200μl/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：100的比例進(jìn)行稀釋（例如：20μl HRP酶聯(lián)物中加入2ml檢測緩沖液。如果整個(gè)包被板都使用，可以用12ml檢測緩沖液稀釋120μl HRP酶聯(lián)物，棄去剩余試劑。

3）DHT標(biāo)準(zhǔn)品，即用。6支，內(nèi)含：DHT、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的DHT制備而成。下表為標(biāo)準(zhǔn)品的大概濃度，具體濃度請見試劑瓶標(biāo)簽：

標(biāo)準(zhǔn)品	濃度	體積/支
標(biāo)準(zhǔn)品 A	0 pg/ml	2.0 ml
標(biāo)準(zhǔn)品 B	25 pg/ml	0.6 ml
標(biāo)準(zhǔn)品 C	100 pg/ml	0.6 ml
標(biāo)準(zhǔn)品 D	500 pg/ml	0.6 ml
標(biāo)準(zhǔn)品 E	1000 pg/ml	0.6 ml
標(biāo)準(zhǔn)品 F	2500 pg/ml	0.6 ml

儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上有效期，一旦打開，所有的標(biāo)準(zhǔn)品都必須在14天內(nèi)用完或?qū)⑵鋬龃妫�避免反�?fù)凍融。

4）質(zhì)控品，即用，1支，內(nèi)含：DHT、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的DHT制備而成，具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。體積：0.6ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期，一旦打開，所有的質(zhì)控品都必須在14天內(nèi)用完，必免反復(fù)凍融。

5）濃縮冼滌液，10倍濃縮型，1支，內(nèi)含：緩沖液、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，有效期：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進(jìn)行稀釋，如果整個(gè)包被板都使用，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。

6）檢測緩沖液，即用，1支，內(nèi)含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：15ml/支，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。

7） TMB底物液，即用，1支，內(nèi)含：TMB、過氧化氫和非DMF或DMSO，體積：16ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。

8） 終止液，即用，1支，內(nèi)含：1M的硫酸，體積：6ml/支，儲(chǔ)存：冷藏于2-8℃環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個(gè)月或標(biāo)簽上的有效期。

樣品預(yù)處理：無

使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須作雙份檢測，一旦實(shí)驗(yàn)開，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去。

1）制備好即用型的HRP酶聯(lián)物和檢測緩沖液。如果用尿液作實(shí)驗(yàn)，應(yīng)將尿液稀釋好。

2）取出所需數(shù)目的板條，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏。

3）將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應(yīng)的微孔中（雙份檢測）

4）在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物（建議您使用多道移液器）。

5）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上（200rpm）溫育1個(gè)小時(shí)。

6）每孔用300μl洗滌液洗板3次，并在吸水紙上拍干。

7）以相同的時(shí)間間隔，在每一微孔中加入150μl TMB底物液。

8）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上溫育15-20分鐘。

9）在每一微孔中加入50μl終止液。

10）加終止液后20分鐘內(nèi)450nm處讀取OD值。

*如果OD值超過450nm濾光片的檢測上限，我們可用405n或415nm代替，OD值可能會(huì)比較低，但它并不會(huì)影響樣品和質(zhì)控品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1）計(jì)算兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值。

2）在半對數(shù)坐標(biāo)紙上，以平均OD值為Y軸、標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸作一條校準(zhǔn)曲線。如果使用免疫檢測軟件，我們可以作四參數(shù)曲線。

3）計(jì)算每一未知樣品OD值的平均值。

4）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品的濃度。

5）將獲得的樣品濃度值乘以稀釋因子。然后乘以24小時(shí)尿液的體積，從而其閃單位可變?yōu)閜g/24小時(shí)。最后將pg/24小時(shí)除以10⁶，相應(yīng)的單位就變成μg/24小時(shí)。

6）如果血清樣品濃度高于2500pg/ml,我們可以用標(biāo)準(zhǔn)品A將其進(jìn)行稀釋（但稀釋比例不高于1：8）。則其結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。

 

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

 

 

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