S100B蛋白ELISA試劑盒使用說明

德國DRG原裝進(jìn)口，貨號：EIA5169

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預(yù)期用途

此試劑盒用于人血清和血漿中S100B濃度的檢測，僅用于實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)原理

此試劑盒基于兩抗體與S100B結(jié)合，一個抗體固定在包被板上，另外一個則被HRP標(biāo)記。試驗(yàn)基于兩步法，每次洗板后，結(jié)合的和游離的就會分離，底物液TMB加入，會發(fā)生顏色變化，終止液加入終止反應(yīng)，吸收值檢測。樣品中的S100B的濃度計(jì)算可從標(biāo)準(zhǔn)品著手。顏色強(qiáng)度與樣品中的S100B的濃度成正比

試劑盒組成

1.       S100B標(biāo)準(zhǔn)品，6支，凍干粉，STD0-STD5

2.       質(zhì)控品，2支，凍干粉，陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控

3.       酶聯(lián)物緩沖液，1支，20ml，Tris緩沖液，BSA10g/L,0.05%吐溫

4.       酶聯(lián)物，1支，1ml，HRP標(biāo)記的抗S100B

5.       試驗(yàn)緩沖液，1支，12ml，Tris緩沖液，BSA10g/L，穩(wěn)定劑

6.       包被板，可拆，包被有抗S100B

7.       TMB底物液，1支，15ml，H₂O₂-TMB 0.25g/L，避免皮膚接觸

8.       終止液，1支，15ml，0.15mol/L硫酸，避免皮膚接觸

9.       洗滌濃縮液，50X，1支，20ml，NaCl 45g/L,吐溫20 55g/L

實(shí)驗(yàn)所需但試劑盒未提供

1.       去離子水

2.       自動移液器

3.       酶標(biāo)儀

注意：所有試劑應(yīng)保存在黑暗處2-8℃，微孔板平衡至室溫方可打開包裝，使用完后立即密封，不要移去未用板條的粘合條

注意事項(xiàng)

1.       試劑內(nèi)含有硫柳汞防腐劑

2.       配制和吸取試劑時應(yīng)按最高精確度要求操作

3.       所有試劑都有各自的批號，不要混用不同批次內(nèi)的物質(zhì)

4.       S100B的檢測范圍為10-5000pg/ml

5.       標(biāo)準(zhǔn)品的具體濃度見瓶上標(biāo)簽

6.       不要使用嚴(yán)重溶血樣品

7.       避免底物液暴露在陽光，金屬或氧化劑下

操作步驟

樣品準(zhǔn)備

S100B檢測可使用人血清或血漿，不要使用溶血樣品，樣品可在2-8℃下保存1天，更長的保質(zhì)期的話可放置在-20℃，避免反復(fù)凍融，不要將樣品放置在室溫下的時間過長，樣品濃度高于5ng/ml時，應(yīng)用試驗(yàn)緩沖液進(jìn)一步稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的準(zhǔn)備

用1ml的去離子水配制標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，可保存于2-8℃下4周，-20℃6個月，建議分裝保存于-20℃。標(biāo)準(zhǔn)品濃度見標(biāo)簽。避免反復(fù)凍融和長時間暴露在室溫下

酶聯(lián)物的準(zhǔn)備

使用前2小時準(zhǔn)備

50ul的酶聯(lián)物+1.0ml的酶聯(lián)緩沖液（稀釋的酶聯(lián)物的量與試驗(yàn)樣本量成正比），混合5min，避免氣泡產(chǎn)生，室溫下（22-28℃）可保存3小時

洗滌液準(zhǔn)備

10ml的洗滌濃縮液+490ml的去離子水；不同的體積但保持同一稀釋比例；室溫下（22-28℃）可保存至標(biāo)簽上所示的有效期

實(shí)驗(yàn)步驟

建議做雙份檢測，包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品，還有一個空白對照孔

試劑	標(biāo)準(zhǔn)品	樣品/質(zhì)控	空白對照
標(biāo)準(zhǔn)品S0-S5 質(zhì)控	50ul
樣品/質(zhì)控		50ul
試驗(yàn)緩沖液	50ul	50ul
室溫下孵育2小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
稀釋的酶聯(lián)物	100ul	100ul
室溫下孵育1小時，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次
TMB底物液	100ul	100ul	100ul
黑暗處，室溫下孵育30min
終止液	100ul	100ul	100ul
輕輕搖動微孔板，酶標(biāo)儀上讀數(shù)（450nm）

結(jié)果計(jì)算

1.       計(jì)算每一標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均OD值

2.       以標(biāo)準(zhǔn)品吸收值和濃度繪制一最合適的標(biāo)準(zhǔn)曲線（三次回歸或四參數(shù)）

3.       從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可直接讀取樣品濃度

 

附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計(jì)算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果

 

 

 

 

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