Western Blot實驗相關試劑的配制

30%(w/v)丙烯酰胺溶液  

丙烯酰胺             29g

甲叉雙丙烯酰胺       1g

加去離子水，定容至 100ml 調整溶液 pH 值不超過 7.0，置棕色瓶中貯存于室溫或4℃。 

10%SDS 

SDS                    10g

蒸餾水至             100ml

50℃ 水浴下溶解，室溫保存。如在長期保存中出現(xiàn)沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

1.5mol/L Tris·HCl （pH8.8）

Tris (MW121.14)      45.43g

超純水              200ml

溶解后，用濃鹽酸調pH至8.8，最后用超純水定容至250ml，室溫下保存。

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）

Tris (MW121.14)      15.14g

超純水            200ml

溶解后，用濃鹽酸調pH至6.8，最后用超純水定容至250ml，室溫下保存。

10% 過硫酸胺（AP）

過硫酸胺             0.1g

超純水               1.0ml

溶解后，4℃避光保存，保存時間為1周。（可先將過硫酸胺干粉稱好分量后放在EP管中，一次性多裝幾管，使用時加入超純水即可） 

20%Tween20  

Tween20             20ml

蒸餾水至             100ml

混勻后4℃保存。

1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF                 0.174g

異丙醇                100ml

溶解后，分裝于1.5ml離心管中，-20℃保存。

單去污劑裂解液（PMSF）

1mol/L Tris·HCl （pH8.0）    2.5ml

NaCl                                0.438g

TritonX-100                           0.5ml

蒸餾水至                                50ml

混勻后4℃保存。使用時，加入PMSF至終濃度為100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。

RIPA裂解配方

50 mM Tris-HCl pH 7.4

150 mM NaCl

1 mM PMSF （用前加）

1 mM EDTA

1% Triton x-100

1% 脫氧膽酸鈉

0.1% SDS

G250 考馬斯亮藍溶液 （蛋白定量專用）

考馬斯亮藍G250      100mg

95%乙醇             50ml

磷酸                      100ml

蒸餾水至              1000ml

配制時，先用乙醇溶解考馬斯亮藍染料，再加入磷酸和水，混勻后，用濾紙過濾，4℃保存。

100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）

BSA                           0.1g

0.15 mol/L NaCl                   1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白標準曲線時，用0.15 mol/L NaCl進行100倍稀釋成1mg/ml，-20℃保存。

還原型 5XSDS 上樣緩沖液  

0.5 mol/L Tris·HCl （pH6.8）    2.5ml

二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）      0.39g

SDS                             0.5g

溴酚藍                          0.025g

甘油                            2.5ml

混勻后，分裝于 1.5ml 離心管中，4℃保存。

電泳液緩沖液    

Tris （MW121.14）          3.03g

甘氨酸（MW75.07）        18.77g

SDS                            1g

蒸餾水至                     1000ml

溶解后室溫保存，次溶液可重復使用 3～5 次。

（電泳液可以回收重復利用，一般將回收的電泳液加入垂直電泳槽的下半部分，上半部分最好使用新鮮的電泳緩沖液）

（可以配制成 10×電泳緩沖液進行保存，稀釋 10 倍使用）

轉移緩沖液    

半干

24mmol/L Tris （MW：121.14）     1.4536 g

192mmol/L  甘氨酸（MW：75.07） 7.20672 g

20 ％甲醇                        100 ml

蒸餾水至                         500ml

浸漬（濕轉）

48mmol/L Tris             2.375g

39mmol/L 甘氨酸           11.25g

20 ％甲醇                  200ml

0.0375％SDS            0.375g

蒸餾水至                  1000 ml

溶解后室溫保存，次溶液可重復使用 3～5 次（次溶液最好保存在 4 度冰箱，最多使用 5 次左右，不然影響轉移效率）。（先用蒸餾水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS，然后再加入甲醇，最后補足液體。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比較困難）

（可以配制成 2×轉移緩沖液進行保存，稀釋后使用）

10X 麗春紅染液  

麗春紅 S         2g

三氯乙酸        30g

磺基水楊酸      30g

蒸餾水至         100ml

TBS 緩沖液 

1 mol/L Tris·HCl （pH7.5） 10ml

NaCl                        8.8g

蒸餾水至                    1000ml

（可以配制成 10×TBS 緩沖液進行保存，稀釋 10 倍使用）

TBST 緩沖液       

20 ％Tween20        1.65ml

TBS                700ml

混勻后即可使用，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。

封閉液       

脫脂奶粉（國產）             5g 

TBST                         100ml

最好現(xiàn)用現(xiàn)配。

洗脫抗體緩沖液  

14.4 mol/L β-巰基乙醇                  700μl（通風廚里加）

SDS                                                  2g

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）                   12.5ml

超純水至                                           100ml

配制時，在通風廚內進行。4℃保存�？芍貜褪褂� 1 次。（可用可不用）