泛素化蛋白快速富集純化黑科技-TUBEs

       泛素化是一種常見的調(diào)節(jié)蛋白的穩(wěn)定性和功能的翻譯后修飾。蛋白的泛素化需要3種酶的參與，分別是泛素活化酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）、泛素偶聯(lián)酶（ubiquitin conjugation enzyme，E2）和泛素連接酶（ubiquitin ligase，E3）。在3種酶的作用下，泛素（ubiquitin，ub）分子的C端羧基與底物蛋白賴氨酸（Lys）殘基的Ԑ氨基形成酰胺異構(gòu)肽。同時，泛素也能發(fā)生泛素化修飾形成不同的泛素鏈，而不同的泛素鏈又介導(dǎo)不同的生物功能。泛素化修飾不僅參與底物蛋白的26S蛋白酶體降解過程，還參與基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期、DNA損傷和免疫應(yīng)激等生物過程。大規(guī)模富集泛素聚合物是研究泛素化系統(tǒng)的關(guān)鍵技術(shù)。傳統(tǒng)的富集泛素化蛋白的常用手段是標(biāo)簽富集或者高親和力抗體富集，這種基于抗體的泛素蛋白質(zhì)組學(xué)對于大規(guī)模泛素化系統(tǒng)的研究是非常昂貴的，而且，目前市面上大多數(shù)供應(yīng)商出售的泛素抗體是非選擇性的，無法滿足研究學(xué)者的多樣需求。

 

 

       泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域（ubiquitin-binding domains，UBD）是一種可識別和結(jié)合泛素化修飾的蛋白小模塊。根據(jù)結(jié)構(gòu)域的不同可將UBD分為20個家族，這些UBD對泛素的親和力不等（2~500umol），且存在泛素鏈的偏好性。UBD結(jié)合下的泛素化蛋白在胰蛋白酶的作用下，泛素化底物上的泛素化位點Lys由于泛素化產(chǎn)生一個帶2個甘氨酸標(biāo)簽的分枝狀漏切肽段，這2個甘氨酸標(biāo)簽是由于修飾的泛素分子的C末端通過異肽鍵與泛素化位點的Lys結(jié)合，經(jīng)過胰蛋白酶消化后保留的殘基。產(chǎn)生的信號肽在質(zhì)譜信號中會產(chǎn)生一個114.043Da的質(zhì)量躍遷，結(jié)合漏切的Lys位點，合稱為GG-K信號肽，通過該信號肽結(jié)合數(shù)據(jù)庫搜索引擎可實現(xiàn)對泛素化底物的鑒定。這也是高精度質(zhì)譜技術(shù)實現(xiàn)泛素化底物鑒定的基礎(chǔ)。

 

       基于UBD對泛素的高親和力，泛素研究專家LifeSensors已開發(fā)出利用串聯(lián)泛素結(jié)合實體（Tandem Ubiquitin Binding Entities，TUBE）從細(xì)胞和組織裂解液中特異性分離富集泛素化蛋白的技術(shù)。TUBEs由多個UBDs串聯(lián)構(gòu)成，對泛素鏈親和性極高，而且，TUBEs通過與泛素鏈的結(jié)合可以保護(hù)蛋白質(zhì)不被去泛素化，同時避免靶蛋白發(fā)生蛋白酶體介導(dǎo)的降解，為研究泛素化蛋白質(zhì)組學(xué)提供了很好的工具。

 

       除了研發(fā)和生產(chǎn)可與所有類型的多聚泛素鏈結(jié)合的TUBE（pan-TUBE）之外，LifeSensors還開發(fā)了可選擇性地與K48或K63或線性（M1）多泛素化蛋白結(jié)合的鏈特異性TUBE。

 

 

       TUBE產(chǎn)品優(yōu)勢：

 

       1.可快速有效的實現(xiàn)泛素化蛋白的富集和純化

       2.比單個UBA結(jié)構(gòu)域的親和力高1000倍

       3.與泛素抗體相比有更高的特異性和親和力

       4.保護(hù)蛋白質(zhì)不被去泛素化，同時可避免靶蛋白發(fā)生蛋白酶體介導(dǎo)的降解

 

 

       pan-TUBE——可與所有類型的多聚泛素鏈結(jié)合

 

標(biāo)簽類型	貨號	名稱
磁珠（Magnetic）	UM401M	TUBE 1 (Magnetic Beads)
	UM402M	TUBE 2 (Magnetic Beads)
瓊脂糖珠（Agarose）	UM401	TUBE 1 (Agarose)
	UM402	TUBE 2 (Agarose)
生物素	UM301	TUBE 1 (Biotin)
	UM302	TUBE 2 (Biotin)
GST	UM101	TUBE 1 (GST)
His6	UM201	TUBE 1 (His6)
HRP	UM312	TUBE 2 (HRP)
熒光（Fluorescein/Tamra）	UM502F	TUBE 2 (Fluorescein)
	UM502T	TUBE 2 (TAMRA)

 

       Selective TUBEs——與M1-線性多聚泛素鏈特異性結(jié)合

 

標(biāo)簽類型	貨號	名稱
His6	UM206	M1 TUBE (His6)
生物素	UM306	M1 TUBE (Biotin)
FLAG	UM606	M1 TUBE (FLAG)

       Selective TUBEs——與K48-多聚泛素鏈特異性結(jié)合

 

標(biāo)簽類型	貨號	名稱
磁珠（Magnetic）	UM407M	K48 TUBE HF (Magnetic Beads)
生物素	UM307	K48 TUBE HF (Biotin)
FLAG	UM607	K48 TUBE HF (FLAG)
His6	UM207:	K48 TUBE HF (His6)
GST	UM107	K48 TUBE HF (GST)
熒光（Fluorescein/Tamra）	UM507F	K48 TUBE HF (Fluorescein)
	UM507T	K48 TUBE HF (TAMRA)

       Selective TUBEs——與K63-多聚泛素鏈特異性結(jié)合

 

標(biāo)簽類型	貨號	名稱
磁珠（Magnetic）	UM404M	K63 TUBE (Magnetic Beads)
生物素	UM304	K63 TUBE (Biotin)
FLAG	UM604	K63 TUBE (FLAG)
熒光（Fluorescein/Tamra）	UM504F	K63 TUBE (Fluorescein)
	UM504T	K63 TUBE (TAMRA)

 

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