細(xì)胞轉(zhuǎn)染、重組蛋白、熒光素酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)介紹
■ PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑 (PolyFast Transfection Reagent)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染主要將 DNA/RNA 導(dǎo)入真核細(xì)胞；轉(zhuǎn)染方法五花八門，常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染方法可分為化學(xué)法、物理法和生物法。但是沒(méi)有一種方法是可以通用的，所以不少研究者在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中難免踩雷....
來(lái)！先了解一下常見(jiàn)的幾項(xiàng)轉(zhuǎn)染技術(shù)
不同轉(zhuǎn)染技術(shù)都有各自明顯的優(yōu)缺點(diǎn)，是不是不知道該怎么選擇啦？告訴你一個(gè)絕招吧PolyFast Transfection Reagent！其原理是當(dāng)帶正電荷的聚合物和帶負(fù)電荷的 DNA/RNA 結(jié)合成復(fù)合物后，通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞，并在胞質(zhì)中將核酸釋放出來(lái)，完成轉(zhuǎn)染。
操作簡(jiǎn)單，適用性廣，在體內(nèi)和體外都有很高的轉(zhuǎn)染效率，且對(duì)細(xì)胞幾乎沒(méi)有毒性，這可是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中的一大法寶。
■ Anti-Flag 親和凝膠 (Anti-Flag Affinity Gel)
體外重組蛋白表達(dá)技術(shù)是較常用的蛋白分析手段，目前已滲透到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，其主要流程包括載體構(gòu)建→表達(dá)鑒定→蛋白純化三個(gè)步驟。載體構(gòu)建過(guò)程中，合適的標(biāo)簽蛋白可直接影響后續(xù)蛋白的表達(dá)與純化，本心法主要針對(duì) Flag 標(biāo)簽蛋白！
知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。要想成功的將 Flag 標(biāo)簽蛋白純化下來(lái)，肯定需要了解Flag 標(biāo)簽蛋白是什么啦
Flag 標(biāo)簽蛋白為編碼 8 個(gè)氨基酸的親水性多肽 (DYKDDDDK)，可通過(guò)基因工程技術(shù)加到目的蛋白末端。形成的融合蛋白可以直接進(jìn)行 Flag 親和層析，也可以被抗 Flag 的抗體識(shí)別，也可使用腸激酶將 Flag 標(biāo)簽切除后得到特異性目的蛋白，因此 Flag 標(biāo)簽蛋白已廣泛用于蛋白表達(dá)、純化及功能研究等相關(guān)領(lǐng)域。
本心法中的 Anti-Flag Affinity Gel 是由高質(zhì)量的鼠源 lgG2b 單克隆抗體與瓊脂糖 Sepharose 4B 共價(jià)偶聯(lián)而得，具有較高的 Flag 標(biāo)簽蛋白結(jié)合容量，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)簽蛋白的免疫沉淀、蛋白純化實(shí)驗(yàn)。
圖 3. Anti-Flag Affinity Gel 的組成成分
圖 4. Anti-Flag Affinity Gel 的使用步驟 (僅供參考)
■ 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit)
熒光素酶是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的總稱，可催化熒光素氧化成氧化熒光素，并在此過(guò)程中發(fā)出生物熒光，可用熒光測(cè)定儀測(cè)定。這一反應(yīng)體系廣泛用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控和 miRNA 靶基因驗(yàn)證等方面的研究。
目前最常見(jiàn)的熒光素酶是螢火蟲熒光素酶 (Firefly luciferase) 和海腎熒光素酶 (Renilla luciferase)，前者用于熒光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)，后者則作為內(nèi)參，消除細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等差異的影響，使結(jié)果更準(zhǔn)確。
本心法中的 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，可實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快捷、靈敏度高。
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高效低毒、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好的轉(zhuǎn)染試劑盒�？筛咝У貙�(duì) DNA、RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染。對(duì)多種常見(jiàn)細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，對(duì)原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較好的效果。 |
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是一種純化的小鼠 IgG2b 單克隆抗體，共價(jià)連接瓊脂糖 Sepharose 4B。可用于大腸桿菌、酵母、昆蟲和哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的Flag標(biāo)記蛋白的高效純化或免疫沉淀 (IP)。 |
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Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。 |
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