|
服務包括調(diào)控元件的克隆，基因修飾，基因報告系統(tǒng)、基因表達系統(tǒng)和轉(zhuǎn)基因載體的構建
|
|||||||||||||||||
| [發(fā)表評論] [本類其他服務] [本類其他服務商] | ||||||||||||||||||
| 服務商： 百恩維生物科技有限公司 | 查看該公司所有服務 >> |
基于分子克隆技術平臺，我們提供的服務包括任何DNA片段的克隆，包括任何DNA調(diào)控元件的克隆及ShRNA基因干涉質(zhì)粒、基因表達、基因打靶等質(zhì)粒的構建。 表達系統(tǒng)包括E. coli、昆蟲及哺乳類細胞。
一. 多ShRNA干涉construct的構建
將多個ShRNA同時克隆到一個載體上，可作用于同一個基因，其沉默效率高達90%以上，甚至接近100%。該系統(tǒng)免除了建立常規(guī)ShRNA基因干涉系統(tǒng)的最佳序列摸索過程，可真正替代傳統(tǒng)的基因沉默技術和基因敲除技術。
二. 哺乳類細胞附加體非整合表達系統(tǒng)的構建
其附加體可以象質(zhì)粒一樣在哺乳類細胞內(nèi)復制形成多拷貝但又不整合到細胞的基因組中，因此既能實現(xiàn)基因的高表達又免除了基因整合所帶來的副作用。另一方面，附加體載體的DNA裝載量異常之大，幾乎可容納任何大小的基因。因此，我們建立的附加體非整合表達系統(tǒng)免除了常規(guī)基因修飾、基因表達和基因治療過程中合適載體篩選的繁瑣過程。
說明：
1. 一般性DNA 克隆服務
1) 以動物組織或細胞為模板，提取獲得gDNA或者cDNA，從中擴增基因、啟動子等功能元件�？蓱蛻粢螅瑢⒒蚱位蛘吒鞴δ茉蝸喛寺≈粮鬏d體。
2) 由客戶提供已帶有欲克隆基因片段或各功能元件片段的載體，通過PCR從中擴增基因或功能元件，并將之亞克隆至另一載體。
實驗步驟及周期：
1) 從動物組織或細胞中獲取gDNA或者cDNA，1～2個工作日。(若由客戶提供已帶有欲克隆基因片段或各功能元件片段的載體,此步可免)
2) PCR擴增相關基因或功能元件，連接至T載體測序。8～9個工作日。
3) 將測序后符合要求的基因或功能元件片段亞克隆至目的載體。5個工作日。
2. DNA亞克隆服務（同一般性DNA 克隆服務）
服務內(nèi)容：
1) 某基因片段或某功能元件片段在載體間的亞克隆轉(zhuǎn)移。
2) 多基因融合表達載體或多基因多表達載體的構建。
3. 已有基因或功能元件的定點突變（某點或某段區(qū)域均可）
服務內(nèi)容：
雙鏈DNA（啟動子/基因/特定序列）中任何位點的定點突變。
4. 基因啟動子元件的調(diào)取和克隆
若客戶提供基因組DNA，按基因調(diào)取和克隆價格的2/3計算。
若客戶不提供基因組DNA，每次加收500元的DNA提取費用。
5. 特殊DNA construct的構建
若客戶提供載體，則按以上一般DNA克隆的價格收費。
若需我方購買它方公司載體，則載體購買費由客戶承擔。
若用我方構建的載體，每個載體的每次使用在一般克隆基礎上加收載體構建的費用。
6. 多ShRNA干涉construct的構建
特點：將4個ShRNA同時克隆到一個載體上，若作用于同一個基因，其沉默效率高達90%以上，甚至接近100%。
客戶須知：
1) 調(diào)取基因所需的原材料如由客戶提供，客戶應保證所提供原材料即基因模板的正確性。如基因模板本身具有移碼突變或其它無義堿基突變，由此造成的實驗時間延誤、重復實驗費用或其它經(jīng)濟損失均由客戶承擔。（從客戶提供的基因模板調(diào)取基因，如重復兩次，均在相同位置出現(xiàn)相同突變，則認為是模板問題。）
2) 如目的基因所在的載體由客戶提供，則客戶需要提供足量高純度的質(zhì)粒（>5ug，電泳圖清晰，達酶切測序要求）及本公司鑒定工作所需的材料。
3) 本公司在收到客戶提供的材料后會在第二個工作日起開始鑒定工作，鑒定的時間不包括在實驗周期內(nèi)。
4) 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。
服務承諾：
1) 調(diào)取的基因或功能元件片段無移碼突變（原材料由客戶提供的不在此例），無義堿基突變控制在1%以內(nèi)。
2) 完整的實驗報告、測序報告。
