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microRNA質(zhì)粒/載體構(gòu)建（過表達(dá)載體構(gòu)建，靶基因報告載體/ 熒光素酶報告載體構(gòu)建 ）
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| 服務(wù)商： 百奧邁科生物技術(shù)有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
microRNA 過表達(dá)載體構(gòu)建
真核生物MicroRNA的產(chǎn)生有三種形式。1）miRNA以長的pri-miRNA形式從基因組中轉(zhuǎn)錄出來；2）pri-miRNA被RNAaseIII內(nèi)切酶或剪接體組分切割，形成大約60~70nt的pre-miRNA；3）pre-miRNA被運出細(xì)胞核，進(jìn)而在Dicer樣內(nèi)切酶切割下，形成miRNA。
本公司提供miRNA質(zhì)粒的構(gòu)建服務(wù)，采用U6、CMV啟動子構(gòu)建的miRNA表達(dá)載體，可以在細(xì)胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出miRNA，行使其功能。同時還可以提供pre-miRNA表達(dá)載體及腺病毒載體 (Adenoviral)，慢病毒載體(Lentiviral)，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 (Retroviral) 病毒型載體構(gòu)建服務(wù)�；谳d體的miRNA構(gòu)建流程：
1、客戶可選：
提供不同長度、不同形式，由客戶自行設(shè)計的miRNA，由本公司將其克隆到miRNA表達(dá)載體上。
也可據(jù)需要，提供來自Sanger miRNA數(shù)據(jù)庫的miRNA序列，由本公司將其克隆到miRNA表達(dá)載體上。
提供商業(yè)化的miRNA表達(dá)載體。
2、合成設(shè)計好的DNA序列，將其克隆到客戶要求的載體上，并通過測序進(jìn)行驗證。
3、構(gòu)建好的miRNA質(zhì)粒連同測序文件、產(chǎn)品說明書一起寄送到客戶手中。
| 載體名稱 | 啟動子 | 篩選基因 | 標(biāo)記基因 |
| pRNAi-U6.1/Neo | U6 | Neomycin | GFP |
| pRNAi-CMV3.2/Neo | CMV | Neomycin | GFP |
| pRNAi-CMV4.1/Neo （pSilencer4.1） |
CMV | Neomycin |
A. 優(yōu)點:
MiRNA 熒光素酶報告載體具有以下優(yōu)點:
· 功能性檢測：是一種功能性的分析方法，用于監(jiān)測細(xì)胞內(nèi)miRNA介導(dǎo)的靶基因的調(diào)控
· 可定量分析： miRNAs介導(dǎo)的調(diào)控可以通過熒光素酶基因的表達(dá)進(jìn)行定量監(jiān)測
· 可構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系–載體可用于構(gòu)建表達(dá)報告基因的穩(wěn)定細(xì)胞系.
B. 原理：
pLuc-3UTR報告載體是一系列基于熒光素酶報告的構(gòu)建體，用于監(jiān)測miRNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)靶基因調(diào)控。每個載體含有CMV啟動子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達(dá)并與3 ' UTR結(jié)合，導(dǎo)致熒光素酶基因表達(dá)的抑制。因此miRNA介導(dǎo)的特異靶的調(diào)控可通過熒光素酶活*進(jìn)行監(jiān)測。比較二個樣本熒光素酶活性可解析調(diào)控，明確差異。
本公司的可免費提供的microRNA靶基因報告載體有：
| 載體名稱 | 啟動子 | 標(biāo)記基因 |
| pGL4.17 | CMV | 熒光素酶基因 |
| pGL－Basic | CMV | 熒光素酶基因 |
| pGL3－Control | CMV | 熒光素酶基因 |
| pRL－TK | CMV | 熒光素酶基因 |
