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生物研發(fā)服務(wù)

文庫構(gòu)建

Library construction

cDNA文庫構(gòu)建,全長文庫構(gòu)建，，酵母雙/單雜交文庫構(gòu)建，膜蛋白酵母文庫構(gòu)建，腺病毒包裝文庫構(gòu)建，慢病毒包裝文庫構(gòu)建，真核/原核表達(dá)文庫構(gòu)建，消減文庫構(gòu)建，基因組文庫構(gòu)建，RACE服務(wù)等。

服務(wù)類別：	分子與細(xì)胞	總訪問：	1848
最后更新：	2011-6-17	半年訪問：	50
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服務(wù)商：上海�？粕锛夹g(shù)有限公司

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服務(wù)介紹
公司簡介

一、初級cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程

1.1 客戶樣品QC，Total RNA的提取。

1.2 mRNA的分離。

1.3 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。

1.4 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。

1.5 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

1.6 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。

1.7 cDNA文庫的QC。

a) 檢測文庫庫容量。

b)每個文庫隨機挑取32個克隆子，PCR檢測檢測平均插入片段大小，陽性率。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 文庫庫容量：大于0.5*10^7 CFU。

 4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。

 4.3 陽性率：大于95%。

4.4 我們構(gòu)建的文庫相對于市場上的其他文庫構(gòu)建方法（比如SMART方法），具有以下優(yōu)勢：

1）我們從mRNA為模板直接進(jìn)行cDNA雙鏈的合成，沒有經(jīng)過任何擴增的過程,最大限度的保證了文庫的質(zhì)量和忠實性。

2）使用了目前市場上最好的反轉(zhuǎn)錄酶(Superscrip III)，保證文庫的片段長度和全長率，該普通文庫的全長率會在45%以上。

3）使用重組的方法，不經(jīng)過任何的酶切過程，不用擔(dān)心cDNA被切斷而影響文庫質(zhì)量，重組效率較酶切連接高很多，可以大大提高原始文庫的庫容量（可以達(dá)到0.5*10^7 CFU 以上的原始文庫庫容量）。

5.服務(wù)時間

20個工作日內(nèi)。

二、全長cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程

1.1 客戶樣品QC，Total RNA的提取。

1.2 mRNA的分離。

1.3 采用CAP Trapper法進(jìn)行全長mRNA的富集。

1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。

1.5 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。

1.6 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。

1.8 cDNA文庫的QC。

a) 檢測文庫庫容量。

b)每個文庫隨機挑取32個克隆子，PCR檢測檢測平均插入片段大小，陽性率。

c) 隨機挑取24個克隆進(jìn)行正向測序，通過NCBI的BLSTAX分析全長率。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，24個克隆正向測序報告，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 文庫庫容量：大于1*10^6 CFU。

 4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。

 4.3 陽性率：大于95%。

4.4 全長率：大于65%。

4.5 我們構(gòu)建的文庫相對于市場上的其他文庫構(gòu)建方法具有以下優(yōu)勢：

1）我們從mRNA為模板直接進(jìn)行cDNA雙鏈的合成，沒有經(jīng)過任何擴增的過程,最大限度的保證了文庫的質(zhì)量和忠實性。

2）使用了目前市場上最好的反轉(zhuǎn)錄酶(Superscrip III)，保證文庫的片段長度。

3）使用重組的方法，不經(jīng)過任何的酶切過程，不用擔(dān)心cDNA被切斷而影響文庫質(zhì)量，重組效率較酶切連接高很多，可以大大提高原始文庫的庫容量。

5.服務(wù)時間

25個工作日內(nèi)

三、高全長比例全長cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程

1.1 客戶樣品QC，Total RNA的提取。

1.2 mRNA的分離。

1.3 使用特殊的抗體進(jìn)行全長mRNA的富集。

1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。

1.5 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。

1.6 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。

1.8 cDNA文庫的QC。

a) 檢測文庫庫容量。

b)每個文庫隨機挑取32個克隆子，PCR檢測檢測平均插入片段大小，陽性率。

c) 隨機挑取24個克隆進(jìn)行正向測序，通過NCBI的BLSTAX分析全長率。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，24個克隆正向測序報告，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 文庫庫容量：大于1*10^6 CFU。

 4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。

 4.3 陽性率：大于95%。

4.4 全長率：大于85%。

4.5 我們構(gòu)建的文庫相對于市場上的其他文庫構(gòu)建方法具有以下優(yōu)勢：

1）我們從mRNA為模板直接進(jìn)行cDNA雙鏈的合成，沒有經(jīng)過任何擴增的過程,最大限度的保證了文庫的質(zhì)量和忠實性。

2）使用了目前市場上最好的反轉(zhuǎn)錄酶(Superscrip III)，保證文庫的片段長度。

5.服務(wù)時間

35個工作日內(nèi)

四、均一化cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程
1.1 對原始文庫進(jìn)行QC。
1.2 通過鋪板培養(yǎng)，抽提初級cDNA文庫的混合質(zhì)粒；
1.3 基因組DNA的提取和酶切處理
1.4 基因組DNA親和體系的構(gòu)建
1.5 基因組DNA與混合質(zhì)粒的飽和雜交
1.6 洗脫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞
1.7 均一化cDNA文庫的鑒定
     a) 檢測庫容量（總CFU）
     b) 隨機挑取32個克隆子，PCR方法檢測平均插入片段大小。
     c) 抽提均一化cDNA文庫的混合質(zhì)粒（大抽），qPCR檢測均一化前后兩個文
       庫總質(zhì)粒中兩個看家基因的表達(dá)量差異，以判斷均一化的效果。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少1*10^6 CFU的文庫菌液，200ug以上的基因組或2mg以上的組織樣本。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 文庫庫容量：大于1*10^5 CFU。

 4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。

 4.3 陽性率：大于95%。

4.4 均一化后相對于均一化前看家基因拷貝數(shù)降低50倍以上。

5.服務(wù)時間

15個工作日內(nèi)

五、消減cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程
1.1 樣本的QC
1.2 分別抽提Tester和Driver樣本的RNA
1.3 分別分離Tester和Driver樣本的mRNA
1.4 雙鏈cDNA的合成
1.5 cDNA的酶切

1.6 cDNA雜交

1.7 PCR擴增，連接到T載體，轉(zhuǎn)化。

1.8 消減文庫的檢測

a) 檢測庫容量（總CFU）
b) 隨機挑取32個克隆子，PCR方法檢測平均插入片段大小。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），PCR產(chǎn)物，隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 陽性率：大于95%。

5.服務(wù)時間

30個工作日內(nèi)

六、酵母雙雜交（酵母單雜交）cDNA文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程

1.1 客戶樣品QC

1.2 Total RNA的提取。

1.3 mRNA的分離。

1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。

1.5 對合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級純化。

1.6 將分級純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。

1.8 cDNA文庫的QC。

a) 檢測文庫庫容量。

b)隨機挑取32個克隆子，PCR檢測平均插入片段大小，陽性率。

1.9 初級文庫鋪板，抽提質(zhì)粒

1.10 初級文庫質(zhì)粒與PDEST22（或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定載體，根據(jù)客戶需求確定載體）載體進(jìn)行重組反應(yīng)，電轉(zhuǎn)化，檢測文庫質(zhì)量。

a) 檢測文庫庫容量。

b)每個文庫隨機挑取32個克隆子，PCR檢測平均插入片段大小，陽性率。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的酵母文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），擴增后初級文庫甘油菌，初級文庫中抽質(zhì)粒，隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告，酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 文庫庫容量：大于1*10^7 CFU。

 4.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。

 4.3 陽性率：大于95%。

5.服務(wù)時間

30個工作日內(nèi)

七、Fosmid文庫構(gòu)建

1. 服務(wù)流程
1.1 樣本的QC
1.2 高質(zhì)量基因組DNA的提取
1.3 基因組DNA的打斷條件優(yōu)化
1.4 基因組DNA的打斷處理

1.5 打斷后的DNA連接到載體

1.6 連接產(chǎn)物的包裝和侵染大腸桿菌細(xì)胞

1.7 fosmid文庫的檢測

a) 檢測庫容量（總CFU）
b) 隨機挑取16個克隆子，抽提質(zhì)粒，酶切檢測插入片段大小與陽性率。

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取200ug基因組DNA的樣本，或者至少200ug的基因組DNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的fosmid文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），隨機克隆子的質(zhì)粒酶切鑒定電泳圖，文庫構(gòu)建報告。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 4.1 滴度：大于1*10^5

4.2 陽性率：大于90%。

4.3 平均插入片段：大于35Kbp

5.服務(wù)時間

35個工作日內(nèi)

八、RACE

1. 服務(wù)流程
1.1 樣本的QC
1.2 RNA的提取

1.3 RNA去磷酸化
1.4 RNA去帽子結(jié)構(gòu)

1.5 RNA連接頭

1.6 反轉(zhuǎn)錄

1.7 PCR擴增

2.送樣要求

2.1 針對每個文庫，客戶需提供至少能提取50ug RNA的樣本，或者至少50ug的RNA。

2.2 提供要得到基因的已知序列 (大于300bp)。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 RACE的測序以及拼接結(jié)果，克隆后的質(zhì)粒和菌液。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

4.1 由于RACE的特殊性，無法預(yù)知一定可以得到多長的序列，我們保證得到的序列和客戶提供的已知序列是在同一個基因上。

5.服務(wù)時間

30個工作日內(nèi)

上海海科生物技術(shù)有限公司是一家以技術(shù)服務(wù)，試劑儀器銷售等為一體的高科技公司，是由眾多海內(nèi)外從事科學(xué)技術(shù)研究和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化研發(fā)的專業(yè)人士共同創(chuàng)立的新型科技企業(yè)，公司專注于向國內(nèi)生命科學(xué)研究、生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)研發(fā)及醫(yī)學(xué)臨床提供全方位現(xiàn)代實驗技術(shù)服務(wù)，高質(zhì)量的試劑、儀器等。
公司成立于2008年初，主要為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的技術(shù)服務(wù)，如文庫構(gòu)建、細(xì)胞培養(yǎng)、測序、基因合成、二代測序、miRNA array、蛋白表達(dá)、病毒包裝等各種技術(shù)服務(wù)。在試劑產(chǎn)品方面，代理銷售多種進(jìn)口試劑，包括Invitrogen、ABI、sigma、R&D等眾多國外知名品牌，產(chǎn)品涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等多領(lǐng)域。同時，代理銷售國內(nèi)知名廠商的優(yōu)質(zhì)科研儀器、耗材。
“做客戶最滿意的公司”是我們的目標(biāo)，“讓客戶滿意”是我們工作的準(zhǔn)則，全力將最好的服務(wù)和產(chǎn)品提供給廣大客戶，極大的減少您在試驗上所耗費的人力物力。24小時快速給出服務(wù)方案，解決辦法，報價等是�？粕镆回灥姆⻊�(wù)宗旨。經(jīng)過幾年的不懈努力，海科生物公司打造了一只強大的服務(wù)團隊，在市場我們的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)理念已被越來越多的客戶所認(rèn)可，知名度及市場占有率大幅提高。
我們深知"讓客戶滿意"不是一句空話，是需要實實在在的行動的。我們在不斷的提高技術(shù)水平和服務(wù)質(zhì)量，相信，在您的關(guān)心、支持和我們的努力之下，我們會離這個目標(biāo)越來越近的。在此，�？乒救w員工真切的盼望與您攜手并進(jìn)，為您的工作盡我們之薄力，同時我們真誠的希望您對我們的工作提出寶貴的意見和建議，以便進(jìn)一步提高我們的專業(yè)水平，更好的為您服務(wù)。

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