當(dāng)前位置 > 技術(shù)服務(wù) > 生物研發(fā)服務(wù)> 分子與細胞 > 【粥樣硬化Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠模型價格優(yōu)惠】
 |
Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠模型建立實驗技術(shù)服務(wù)轉(zhuǎn)基因小鼠訂購價格優(yōu)惠，保質(zhì)保量
|
|||||||||||||||||
| [發(fā)表評論] [本類其他服務(wù)] [本類其他服務(wù)商] | ||||||||||||||||||
| 服務(wù)商： 至善（北京）健康醫(yī)學(xué)研究院 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠構(gòu)建是利用基因打靶技術(shù)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物的程序，基因敲除小鼠構(gòu)建程序一般為：(1) 構(gòu)建基因打靶載體; (2) 將基因打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法) 導(dǎo)入同源的胚胎干細胞中，使外源DNA 與胚胎干細胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組,將打靶載體中的DNA 序列整合到內(nèi)源基因組中從而得以表達; (3) 篩選發(fā)生同源重組的陽性克隆，通過顯微注射或者胚胎凝集的方法將經(jīng)過遺傳修飾的ES細胞引入受體胚胎內(nèi)制作嵌合體小鼠，在生物活體中研究特定基因的功能�；蚯贸∈笫沟醚芯空邆兡軌蛴^察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改變，從而推斷出特定基因的作用。
Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠構(gòu)建基因打靶的原則是, 外源DNA 片段含有與目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列, 同源重組就發(fā)生在這兩個序列之間�；蚯贸∈笸庠碊NA 序列的定位整合有兩種方式, 即插入型(又稱O 型) 和置換型(又稱8 型)。與此相對應(yīng), 基因敲除小鼠構(gòu)建打靶載體可分為兩類: 插入型載體和置換型載體。
同源重組方法（及基因敲除小鼠）
如果研究者想用基因工程載體代替其等位基因，同時又不會對基因組上的其他基因造成任何影響，那么最好的選擇就是進行同源重組。要進行這一操作，首先要知道靶基因的DNA序列（如圖1）。有了這一信息，用你的目標(biāo)序列替換任何靶基因就都成為可能。關(guān)于同源重組的方法，除本章圖解外還有更多的細節(jié)，這里只介紹基本的原理。
基因敲除小鼠構(gòu)建需要被基因工程載體所替代的靶基因圖譜。編碼序列由方框標(biāo)出，其上下游側(cè)翼DNA序列也被標(biāo)明。由靶基因向兩側(cè)延伸的箭頭代表染色體上其他的連續(xù)DNA序列。
基因敲除小鼠構(gòu)建接下來的步驟就是設(shè)計并構(gòu)建DNA載體，用以插入并替代染色體上的等位基因。這一載體可以包含你所選擇的任何DNA序列，用來將不同的等位基因，即研究者所要插入的目標(biāo)序列（編碼區(qū)或非編碼區(qū)均可）或報告基因（例如：抗生素抗性基因或綠色熒光蛋白）插入基因組中。但不論插入哪種序列，都需要包含一些與靶基因上下游側(cè)翼序列一致的DNA序列（如圖2）.除了陽性篩選標(biāo)記（例如抗生素抗性基因），通常還需要在載體中加入陰性篩選標(biāo)記（例如胸苷激酶，tk）。通常陰性標(biāo)記位于載體上與靶基因同源的序列之外。
基因敲除小鼠構(gòu)建用于同源重組的基因工程載體圖譜。取代序列的上下游側(cè)翼序列與靶基因的上下游側(cè)翼序列一致。陰性篩選標(biāo)記tk位于載體上與靶基因同源的序列下游。
基因敲除小鼠構(gòu)建基因工程載體被加入到包含靶基因的細胞中。其替代等位基因的機理還不完全清楚，但是與細胞減數(shù)分裂和有絲分裂中同源染色體在細胞板處聯(lián)會非常相似，基因工程載體能夠找到靶基因并在與之相同的DNA序列處發(fā)生同源重組（如圖3）。這種重組可能發(fā)生在二者相同側(cè)翼序列的任何位置，但具體位置則由細胞本身決定，而不是人工能夠控制的。
基因敲除小鼠構(gòu)建同源重組發(fā)生前的載體與靶基因。令人驚奇的是，載體自身能夠進入細胞核并與靶基因并排排列。這種排列的機制尚不清楚，但是在某些物種中，這種排列的確比其他物種中的更完美，酵母就是其中之一。小鼠是用于同源重組的較好的哺乳動物系統(tǒng)，但是其中重組發(fā)生的效率不如人類細胞高。
細胞發(fā)生同源重組后，新的DNA片段即目標(biāo)序列被插入了基因組中。其中只是靶基因及其上下游的一些側(cè)翼序列被載體中同源的部分所取代，基因組的其他部分并不受到影響（如圖4）。在載體與靶基因發(fā)生重組后，最初的靶基因序列被交換到了載體上。由于載體不能夠在細胞核中獨立地進行復(fù)制，因此隨著細胞的分裂很快就丟失了。而被替代后的基因組則忠實地進行自我復(fù)制，此時新插入的目標(biāo)序列也就得以復(fù)制了。
發(fā)生了同源重組的細胞（帶有陽性篩選標(biāo)記）可以用加入了特定抗生素的培養(yǎng)基篩選出來。需要注意的是，陰性篩選標(biāo)記并沒有通過同源重組整合到染色體中。
基因敲除小鼠構(gòu)建同源重組發(fā)生后的產(chǎn)物。此時染色體上的靶基因被載體攜帶的目標(biāo)序列所取代，同時還包括一些與載體一致的側(cè)翼序列。而靶基因則被交換到載體上，隨著細胞的分裂而丟失。自此，插入到基因組中的目標(biāo)序列就會像其他所有序列一樣，隨著基因組的復(fù)制而被忠實地復(fù)制。
如果載體與基因組上的非同源區(qū)域并排排列，就可能發(fā)生任意的非同源重組，此時載體上攜帶的陰性選擇標(biāo)記就會被整合到基因組中（如圖5）。
非同源重組發(fā)生前的載體與靶基因。此時發(fā)生的重組是任意的。需要注意的是，在這種情況下，陰性篩選標(biāo)記被整合到了基因組中。
發(fā)生了非同源重組的細胞（如圖6）在陽性篩選標(biāo)記的特定抗性培養(yǎng)基中能夠存活。但是，有一種藥物叫做更昔韋洛（gancyclovir），能夠殺死任何攜帶有tk基因的細胞。因此，發(fā)生了同源重組的細胞就可以在抗生素與更昔韋洛同時存在的培養(yǎng)基中存活，而發(fā)生了非同源重組的細胞則會被更昔韋洛殺死。
非同源重組發(fā)生后的產(chǎn)物。陽性和陰性篩選標(biāo)記同時進入細胞染色體，因此更昔韋洛能夠殺死發(fā)生了非同源重組的細胞。
APOE基因敲除小鼠價格優(yōu)惠 提供質(zhì)量合格證;
Copyright(C) 1998-2024 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com