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百恩維生物技術有限公司提供非整合型慢病毒包裝服務
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非整合型慢病毒包裝
一、非整合型慢病毒的背景
非整合型慢病毒是根據(jù)普通的慢病毒（Lent virus）載體改造而來，該載體可以將外源基因有效地轉導到目的細胞上，可以在細胞質內達到瞬時表達的效果�？捎行У馗腥旧窠浽毎⒏渭毎�、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，同時避免基因整合到宿主染色體造成的危害。具有低免疫性、低危害的特點�？梢匝b載比AAV更大的DNA片段，插入片段可達8kb以上�？梢暂p易感染人、鼠、猴等絕大多數(shù)哺乳類細胞，是一個很好的替代傳統(tǒng)DNA瞬時轉染的基因導入方法，免除了常規(guī)DNA瞬時轉染的條件摸索過程（包括轉染試劑的選擇及劑量比的摸索）。
非整合型慢病毒包裝系統(tǒng)是百恩維掌握的核心技術，在國內外領先。百恩維技術團隊已進行過多種目的基因的非整合型慢病毒包裝，具有豐富的科研經驗�，F(xiàn)有客戶包括研究所、醫(yī)院、生物公司等。
二、非整合型慢病毒包裝技術服務包含內容：
（一）非整合型慢病毒載體的構建：
l 將目的基因克隆構建到非整合型慢病毒載體，根據(jù)不同的研究需求，有用于基因過表達的非整合型慢病毒載體、用于RNAi的非整合型慢病毒載體、用于動物注射的非整合型慢病毒等；
（二）非整合型慢病毒包裝：
- 得到的非整合型慢病毒載體，與輔助載體一起轉染293T細胞進行包裝；
- 將包裝好的病毒超速離心收集；
- 將濃縮病毒進行滴定，滴定結果單位為TU/ml。
（三）非整合型慢病毒鑒定與質量控制：
- 測序鑒定
- 根據(jù)特定引物作RT-PCR鑒定
- 蛋白表達鑒定（根據(jù)客戶要求）
三、非整合型慢病毒載體應用
l 動物體內注射
l 用于轉染其他病毒難于轉染的細胞，比如神經元細胞、干細胞或其它原代細胞
四、非整合型慢病毒的使用
l 表達
本產品感染細胞后，至少要培養(yǎng)24~48小時才能檢測目的基因的表達。原因是慢病毒載體的基因組是RNA，需要反轉錄為DNA，并插入細胞染色體后才能表達。
l 感染細胞最佳MOI的測定
MOI（Multiplicity of Infection，感染復數(shù)）是指每個細胞感染的病毒數(shù)，通常
MOI越高，病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞
（如293細胞），MOI=1時，80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞
，感染效率較低。我們建議通過比較不同MOI （比如0、1、5、10、50、100等），選擇適合的MOI進行實驗（可以考慮選用攜帶報告基因的病毒，比如Lenti-EGFP）。
五、如何避免非整合型慢病毒載體潛在的復制型和致癌的風險：
盡管非整合型慢病毒載體沒有出現(xiàn)過任何意外，但為避免潛在的風險，操作者在實驗中謹記如下原則！
所有操作均應盡量在BSL2級生物安全柜中進行，并佩戴一次性口罩和手套，尤其要避免病毒接觸口、眼、鼻、耳、傷口等身體開放性區(qū)域，避免產生氣溶膠，tip頭一定要選擇帶有濾芯的。必須高度注意被污染的尖銳物品，包括針頭、注射器、載玻片、移液管、毛細玻璃吸管和解剖刀。每次實驗后，立即清理所有接觸過病毒的器具，均應高壓消毒再進行下一步處理。顯微鏡臺、生物安全柜臺面等使用后，用70%乙醇擦拭。意外灑落的含病毒的液體，用衛(wèi)生紙吸干后，用0.6%次氯酸鈉溶液浸泡被污染處1h。裝盛非整合型慢病毒載體的實驗用品，要單獨放置，標示清楚。盡量避免意外灑落。對共用實驗室的人員進行非整合型慢病毒安全培訓或提示。
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