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百恩維的慢病毒包裝系統(tǒng)是四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。百恩維技術(shù)團(tuán)隊(duì)已進(jìn)行過多種目的基因的慢病 毒包裝，具有豐富的科研經(jīng)驗(yàn)�，F(xiàn)有客戶包括研究所、醫(yī)院、生物公司等。
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慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)
一、慢病毒背景介紹
慢病毒（Lent virus）載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展而來的基因載體，該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，達(dá)到持久性表達(dá)的效果�？捎行У馗腥旧窠�(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，效果非常理想，具有廣闊的應(yīng)用前景。
慢病毒包裝系統(tǒng)由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。慢病毒表達(dá)載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒則可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（293包裝細(xì)胞），在細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染。
百恩維的慢病毒包裝系統(tǒng)是四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。百恩維技術(shù)團(tuán)隊(duì)已進(jìn)行過多種目的基因的慢病 毒包裝，具有豐富的科研經(jīng)驗(yàn)�，F(xiàn)有客戶包括研究所、醫(yī)院、生物公司等。
二、慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)包含內(nèi)容：
（一）慢病毒載體的構(gòu)建：
l 將目的基因克隆構(gòu)建到慢病毒載體，根據(jù)不同的研究需求，有用于基因過表達(dá)的慢病毒載體、用于RNAi的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等；
（二）慢病毒包裝：
- 得到的慢病毒載體，與輔助載體一起轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝；
- 將包裝好的病毒超速離心收集；
- 將濃縮病毒進(jìn)行滴定，滴定結(jié)果單位為TU/ml。
（三）慢病毒鑒定與質(zhì)量控制：
- 測序鑒定
- 根據(jù)特定引物作RT-PCR鑒定
- 蛋白表達(dá)鑒定（根據(jù)客戶要求）
三、慢病毒的使用
l 表達(dá)
本產(chǎn)品感染細(xì)胞后，至少要培養(yǎng)24~48小時(shí)才能檢測目的基因的表達(dá)。原因是慢病毒載體的基因組是RNA，需要反轉(zhuǎn)錄為DNA，并插入細(xì)胞染色體后才能表達(dá)。
l 感染細(xì)胞最佳MOI的測定
（如293細(xì)胞），MOI=1時(shí)，80%以上的細(xì)胞均表達(dá)目的基因。而對于非分裂細(xì)胞
，感染效率較低。我們建議通過比較不同MOI （比如0、1、5、10、50、100等），選擇適合的MOI進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（可以考慮選用攜帶報(bào)告基因的病毒，比如Lenti-EGFP）。
四、慢病毒載體的安全性
原理上，慢病毒安全性依據(jù)：
l 刪除了全部HIV-1的編碼基因，在介導(dǎo)目的基因的表達(dá)時(shí)，無HIV-1蛋白的表達(dá)；
l 對5’和3’ LTR分別進(jìn)行了刪除改造，5’LTR缺失U3，換上RSV enhancer/promoter，使載體的復(fù)制不再依賴Tat；3’LTR刪除U3，使其不再有啟動(dòng)/增強(qiáng)活性，成為自滅活（self-inactivating, SIN）載體；
l 病毒包裝必需的3個(gè)蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G（代替HIV-1的Env）分別獨(dú)立放置在3個(gè)質(zhì)粒上（pGag/Pol、pRev、pVSV-G），且互相之間沒有任何同源序列，大大降低了復(fù)制型慢病毒（RCL）的產(chǎn)生幾率；
如何避免慢病毒載體潛在的復(fù)制型和致癌的風(fēng)險(xiǎn)：
盡管慢病毒載體沒有出現(xiàn)過任何意外，但為避免潛在的風(fēng)險(xiǎn)，操作者在實(shí)驗(yàn)中謹(jǐn)記如下原則！
所有操作均應(yīng)盡量在BSL2級生物安全柜中進(jìn)行，并佩戴一次性口罩和手套，尤其要避免病毒接觸口、眼、鼻、耳、傷口等身體開放性區(qū)域，避免產(chǎn)生氣溶膠，tip頭一定要選擇帶有濾芯的。必須高度注意被污染的尖銳物品，包括針頭、注射器、載玻片、移液管、毛細(xì)玻璃吸管和解剖刀。每次實(shí)驗(yàn)后，立即清理所有接觸過病毒的器具，均應(yīng)高壓消毒再進(jìn)行下一步處理。顯微鏡臺、生物安全柜臺面等使用后，用70%乙醇擦拭。意外灑落的含病毒的液體，用衛(wèi)生紙吸干后，用0.6%次氯酸鈉溶液浸泡被污染處1h。裝盛慢病毒載體的實(shí)驗(yàn)用品，要單獨(dú)放置，標(biāo)示清楚。盡量避免意外灑落。對共用實(shí)驗(yàn)室的人員進(jìn)行慢病毒安全培訓(xùn)或提示。
五、慢病毒載體應(yīng)用
l 用于轉(zhuǎn)染其他病毒難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞
l 構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白/RNAi的細(xì)胞系，再導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)
l 基因治療
l 制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
l 做基因敲除研究
l 藥物研究：構(gòu)建表達(dá)受體蛋白的細(xì)胞系，研究藥物的作用
l 高表達(dá)蛋白的細(xì)胞系，大規(guī)模制備目的蛋白。
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