腺病毒包裝服務(wù)

腺病毒包裝技術(shù)服務(wù)

百恩維生物（Biowit）的腺病毒為血清5型腺病毒，缺失了腺病毒的早期表達(dá)基因序列E1和E3區(qū)。E1是腺病毒復(fù)制所必須的，E1的缺失使其不能自身復(fù)制，只能依靠包裝細(xì)胞如HEK293細(xì)胞提供的反式互補(bǔ)進(jìn)行復(fù)制擴(kuò)增，以此保證腺病毒的安全性。E3基因表達(dá)的蛋白能對(duì)抗宿主的抗病毒防御系統(tǒng)，E3區(qū)的去除能減少宿主的體內(nèi)免疫反應(yīng)。

Biowit的腺病毒（Adenovirus，AdV）包裝通常采用的是最新的AdMAX系統(tǒng)，通過Cre-loxp重組酶，使共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中的腺病毒載體穿梭質(zhì)粒和骨架質(zhì)粒（腺病毒基因組質(zhì)粒）在重組酶的作用下產(chǎn)生重組腺病毒，獲得的病毒滴度更高。

同時(shí)Biowit生物也擁有AdEasyTM腺病毒包裝系統(tǒng)，可供客戶選擇。

Biowit腺病毒包裝技術(shù)特點(diǎn)：  

（1） 采用5型E1/E3缺陷型腺病毒，生物安全性更高；

（2） 最新的AdMAX系統(tǒng)，病毒生產(chǎn)更快捷；同時(shí)也有AdEasyTM系統(tǒng)可供選擇。

（3） 有多種過表達(dá)和shRNA腺病毒穿梭載體；

（4） 可帶有熒光標(biāo)記基因（GFP、RFP、YFP等），有多種啟動(dòng)子可更換；

（5） 包裝空間大，最高可插入8K目的基因。

（6） 采用柱純化工藝，純度更高，滴度高達(dá)1010~1011 pfu/mL。

您只需給我們提供詳細(xì)的基因信息，選定的所需的腺病毒載體，我們就能為您生產(chǎn)出符合您要求的帶有目的基因的腺病毒。

另外百恩維生物經(jīng)過鑒定與質(zhì)量控制：載體測序鑒定、熒光法測定滴度、感染活性測定等，保證給您提供的病毒正確可靠。

腺病毒概述

腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組長約35000 bp，理論上可編碼22~40個(gè)基因，兩端各有長約100~150bp的末端反向重復(fù)序列（ITR），在其左端ITR3，端為長約300bp的包裝信號(hào)（Ψ）。病毒顆粒直徑約80~110 nm，病毒衣殼有252個(gè)殼粒，呈規(guī)則的正二十面體面體結(jié)構(gòu)，其中包括240個(gè)六聯(lián)體和12個(gè)位于正二十面體頂部的五聯(lián)體構(gòu)成。

腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。盡管一些類型的腺病毒會(huì)引起人胃腸道、呼吸系統(tǒng)或眼部的急性感染，但是應(yīng)用于基因治療研究的腺病毒是安全的，對(duì)人無致病、致畸、致癌的潛在危害。

利用基因工程手段將腺病毒基因組DNA改造成多種基因操作表達(dá)載體，目前常用的腺病毒包裝系統(tǒng)有：AdMax系統(tǒng)和AdEasyTM系統(tǒng)。

AdEasyTM包裝系統(tǒng) 

AdEasyTM 包裝系統(tǒng)主要的特點(diǎn)是利用Cre/loxP系統(tǒng)在大腸桿菌（BJ5183）中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程，獲得環(huán)狀的重組腺病毒基因組，并且具有在細(xì)菌中復(fù)制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，避免了雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染得到重組腺病毒。

使用這個(gè)系統(tǒng)需要注意以下問題： 

（1） 要用能表達(dá)Cre重組酶的特定的大腸桿菌，建議建立菌種庫以免細(xì)菌發(fā)生變化；

（2） 由于重組是在細(xì)菌中發(fā)生的，微小的基因組變化不易發(fā)現(xiàn)； 

（3） 要獲得高品質(zhì)的重組腺病毒毒種（高病毒產(chǎn)量、高目的基因表達(dá)）應(yīng)挑選多個(gè)重組腺病毒質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，獲得多個(gè)重組病毒來篩選。

AdMax包裝系統(tǒng) 

AdMax包裝系統(tǒng)是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(gè)過程發(fā)生在HEK293細(xì)胞中，從而避免在細(xì)菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用Cre/loxP系統(tǒng)的作用實(shí)現(xiàn)重組，產(chǎn)生重組腺病毒。這個(gè)系統(tǒng)有多種優(yōu)勢，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達(dá)水平高等。

與AdEasy系統(tǒng)相比，AdMax系統(tǒng)有一定的優(yōu)勢：只需要3~4周就能完成從質(zhì)粒構(gòu)建到重組出毒，成功率大于98%（其中95%的克隆含有目的基因），因在真核細(xì)胞內(nèi)重組出毒，保持了對(duì)腺病毒的生存壓力，有助于重組腺病毒的基因組的完整性；而AdEasy系統(tǒng)的出毒成功率只有18~34%（Stratagene公司新版的AdEasy XL系統(tǒng)成功率在94%左右），且在細(xì)菌（BJ5183）中完成病毒基因組重組，理論上，失去了生存壓力的腺病毒基因組更容易發(fā)生突變，病毒遺傳背景及活性可能會(huì)受到影響。

腺病毒載體有下列優(yōu)點(diǎn)：

1、腺病毒的基因結(jié)構(gòu)與功能研究的比較清楚；

2、可裝入基因的容量較大（8K）；

3、轉(zhuǎn)染范圍廣，轉(zhuǎn)染率較高，所有腺病毒載體均有轉(zhuǎn)染分裂期和非分裂期細(xì)胞的能力；

4、不整合到靶細(xì)胞基因組，無插入突變，無致癌性，對(duì)人無致病、致畸、致癌的潛在危害；

5、可以復(fù)制出滴度高（可以達(dá)到1011 pfu/mL）、穩(wěn)定性好、基因轉(zhuǎn)移效率高的病毒；

6、適用于在難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中進(jìn)行的RNA干擾、過表達(dá)特定基因或過表達(dá)特定microRNA研究和In Vivo實(shí)驗(yàn)。