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ShRNA慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)
ShRNA慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:914
最后更新:2016-12-14半年訪問:9
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ShRNA慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)
一、慢病毒背景介紹
慢病毒(Lent virus)載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展而來的基因載體,該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,達(dá)到持久性表達(dá)的效果?捎行У馗腥旧窠(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,效果非常理想,具有廣闊的應(yīng)用前景。
慢病毒包裝系統(tǒng)由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。慢病毒表達(dá)載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒則可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞(293包裝細(xì)胞),在細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感染。
百恩維的慢病毒包裝系統(tǒng)是四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。百恩維技術(shù)團(tuán)隊(duì)已進(jìn)行過多種目的基因的慢病毒包裝,具有豐富的科研經(jīng)驗(yàn),F(xiàn)有客戶包括研究所、醫(yī)院、生物公司等。
二、慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)包含內(nèi)容:
(一)慢病毒載體的構(gòu)建:
目的基因克隆構(gòu)建到慢病毒載體,根據(jù)不同的研究需求,有用于基因過表達(dá)的慢病毒載體、用于RNAi的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等;
(二)慢病毒包裝:
  • 得到的慢病毒載體,與輔助載體一起轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝;
  • 將包裝好的病毒超速離心收集;
  • 將濃縮病毒進(jìn)行滴定,滴定結(jié)果單位為TU/ml。
(三)慢病毒鑒定與質(zhì)量控制
  • 測(cè)序鑒定
  • 根據(jù)特定引物作RT-PCR鑒定
  • 蛋白表達(dá)鑒定(根據(jù)客戶要求)
 

 

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