百恩維生物已成功構建完整的各種蛋白表達技術平臺:包括原核蛋白表達與純化、昆蟲蛋白表達與純化、哺乳動物蛋白表達與純化。根據(jù)客戶的需求,我們提供從基因合成,質(zhì)粒構建,基因表達,蛋白純化、檢測等一站式服務。為了保證蛋白純化的質(zhì)量,百恩維生物建立了嚴格的產(chǎn)品質(zhì)控體系及一整套完善的客戶服務流程、保密制度以確保為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及一流的服務。
我們的蛋白質(zhì)團隊在優(yōu)化基因密碼子、表達載體的設計和構建、融合對象和標簽的選取、特定蛋白純化系統(tǒng)的選擇、蛋白生產(chǎn)工藝的優(yōu)化等方面,擁有極其豐富的經(jīng)驗?梢詽M足客戶個性化的需求。
昆蟲細胞表達與純化
昆蟲細胞表達系統(tǒng)是應用較多的真核表達系統(tǒng),它可以在昆蟲細胞中表達多種外源基因,包括真菌,植物,細菌,病毒的基因。桿狀病毒是一類以昆蟲細胞為天然宿主的雙鏈DNA病毒,具有高度的種屬特異性,不感染脊椎動物,對人、畜無害。目前研究較多的是苜蓿銀紋夜蛾核多角體 (AcNPV) ,其宿主是草地貪夜蛾。而sf9細胞,正是桿狀病毒表達系統(tǒng)的宿主細胞之一。sf9細胞屬于半貼壁型細胞系,可以進行懸浮培養(yǎng),也可以進行貼壁培養(yǎng),在應用于蛋白的表達與制備純化中,有著許多的優(yōu)點。
1、與其他真核表達系統(tǒng)相比,外源基因表達水平高,特別是細胞內(nèi)蛋白。多數(shù)情況下,表達的重組蛋白可溶,折疊正確有翻譯后修飾(如糖基化等),有生物學活性,容易分離純化;
2、昆蟲細胞懸浮生長,容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達重組蛋白;
3、易于表達異源多聚體蛋白,可通過多種重組病毒同時感染昆蟲細胞細胞或用含有多個表達框的一種病毒感染昆蟲細胞來實現(xiàn);
4、安全性。昆蟲桿狀病毒不感染脊椎動物。
百恩維生物提供桿狀病毒表達載體構建、表達檢測以及從大容量細胞培養(yǎng)表達和蛋白純化等一站式蛋白表達技術服務。
1、 克隆目標蛋白編碼序列到昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體上;
2、 制備重組質(zhì)粒;
3、 轉(zhuǎn)染昆蟲細胞,制備病毒;
4、 病毒滴度測定
5、 重組蛋白表達驗證和條件優(yōu)化;
6、 小規(guī)模蛋白表達和純化(500 ml培養(yǎng)物);
7、 大規(guī)模蛋白表達和純化(可選,適合于生物醫(yī)藥研究企業(yè))。
相關技術服務:
昆蟲桿狀病毒制備技術服務:
蛋白表達優(yōu)化技術服務:
1、由客戶提供5-10ml重組桿狀病毒;
2、感染昆蟲細胞獲得高滴度病毒;
3、表達條件優(yōu)化。
優(yōu)化因素包括:
不同的昆蟲細胞系
不同的表達時間;
不同的感染復數(shù)(MOI)。
病毒滴度測定服務
空斑實驗測定滴度。