LDR-PCR測序分型技術(shù)/SNP分型/遺傳多態(tài)性檢測

1. 技術(shù)原理

1.1.  連接酶檢測反應(yīng) (Ligase Detection Reaction，LDR)

LDR是利用高溫連接酶實現(xiàn)對基因多態(tài)性位點的識別。高溫連接酶一旦檢測到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核苷酸接頭對應(yīng)處存在著基因點突變類型的堿基錯配，則連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。

如下圖：右邊的探針與模板有一個堿基不配對，所以連接反應(yīng)不能進(jìn)行，沒有連接產(chǎn)物；左邊的探針與模板DNA完全互補(bǔ)，故進(jìn)行連接反應(yīng)。通過溫控循環(huán)該特異性連接反應(yīng)可反復(fù)進(jìn)行，達(dá)到線性擴(kuò)增的效果。

 

1.2.  測序分型方法

測序分型原理如下圖：(1) 本技術(shù)方案先通過多重PCR (Multiplex PCR)獲得含有待檢測突變位點的基因片斷，然后進(jìn)行多重LDR (Multiplex LDR)，最后通過測序儀電泳讀取檢測結(jié)果；(2) 檢測結(jié)果表明，左邊位點，即突變位點一為A/C雜合子，右邊位點，即突變位點二為T純合子。

 

2. 操作流程

2.1. 抽提基因組DNA

例：基因組DNA抽提結(jié)果電泳圖 

 

2.2. 多重PCR擴(kuò)增

例：多重PCR產(chǎn)物電泳圖


      

2.3. 多重LDR反應(yīng) 

2.4. 測序膠電泳檢測