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甲基化real time PCR(MSP)
Biotnt MS- real time PCR 技術(shù)服務(wù):設(shè)計MS-real time PCR 引物;合成;預(yù)實驗;計算樣本中的甲基化含量。
服務(wù)類別:分子與細胞總訪問:1643
最后更新:2021-3-23半年訪問:16
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實驗方案和技術(shù)服務(wù)流程:

一、預(yù)實驗部分
1、 客戶提供樣本,為組織,血液,細胞或者其他樣本;客戶提供要檢測的基因;簽訂實驗合同,收取預(yù)實驗費用;
2、 實驗分為預(yù)實驗部分和正式實驗部分;預(yù)實驗部分,客戶提供四個預(yù)實驗樣本;
3、 Biotnt 進行 預(yù)實驗樣本的基因組DNA 抽提;Biotnt 進行 預(yù)實驗樣本的甲基化處理,即把DNA 中的胞嘧啶與亞硫酸氫鹽發(fā)生反應(yīng),并使胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶;并完成轉(zhuǎn)化后的DNA 純化和脫硫;
4、 Biotnt 查詢序列,并與客戶確認序列的設(shè)計處(尋找CpG島),進行甲基化引物的設(shè)計;共設(shè)計兩套四對甲基化引物:非甲基化引物(U)和甲基化引物(M),(設(shè)計兩組,一組為正選,一組為候補);
5、 Biotnt 合成以上引物對;
6、 處理后的單鏈 DNA 樣本進行real time PCR 預(yù)實驗;
7、 實驗部分為 甲基化后的樣本,用兩套引物,進行real time PCR, MS-PCR實驗;如果進行雙重復(fù),則一個樣本應(yīng)有孔4的數(shù)據(jù),取均值進行計算;如果進行三重復(fù),則一個樣本應(yīng)有6孔的數(shù)據(jù),取均值進行計算;根據(jù)比較甲基化和非甲基化引物的擴增和溶解曲線,進行實驗判斷;
8、 根據(jù)實驗數(shù)據(jù),Biotnt 判斷預(yù)實驗是否成功,如果成功,則進行正式實驗階段,如果不成功,看是否需要調(diào)整實驗方案,調(diào)整實驗參數(shù);
9、 經(jīng)過兩次調(diào)整實驗方案,仍不能工作,鑒于甲基化real time PCR 的復(fù)雜性,Biotnt 會與客戶協(xié)商,提供目前的實驗參數(shù)和實驗過程,以及實驗結(jié)果,為客戶的進一步實驗提供方向和思路;實驗終止,收取的預(yù)實驗費用不退回;
 
二、正式實驗:
1、 客戶提供樣本;
2、 Biotnt根據(jù)預(yù)實驗確定的參數(shù),進行正式實驗;提供實驗數(shù)據(jù)和實驗報告;
3、 實驗結(jié)束,客戶確認實驗結(jié)果并簽收發(fā)票后,Biotnt 以光盤形式,提供原始實驗數(shù)據(jù),整理后的實驗報告,實驗儀器、試劑和耗材清單,以及引物序列;
 
Biotnt甲基化real time PCR具體實驗計費細節(jié):
總實驗:預(yù)實驗為四個樣本;
一、預(yù)實驗部分:4個樣本預(yù)實驗:合計2040元;
A、進口原裝試劑盒Zymo research 基因組DNA 提取,4個樣本的預(yù)實驗,50元/樣本,共200元;
   抽提+質(zhì)量驗證;
B、甲基化實驗,60元/樣本;4個樣本的預(yù)實驗,共計240元;
C、Real time PCR 甲基化引物的設(shè)計與合成,4套引物,引物費用,800元;摸索實驗條件,4個樣本的預(yù)實驗,共計800元;確定實驗方法;
 
二、正式實驗(10個樣本起做):
A、基因組DNA 提取和硫化處理:正式實驗,10個樣本起做,價格為100元/樣本;
具體步驟:基因組DNA 抽提,質(zhì)量驗證;
B、real time PCR 實驗,MS-PCR, 雙重復(fù) 4孔數(shù)據(jù),120元/樣本。

 

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