百恩維生物提供單雙鏈AAV病毒包裝技術(shù)服務(wù),有AAV2/1-AAV2/9和AAV-DJ十種血清型可供選擇。
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雙鏈腺相關(guān)病毒(scAAV)包裝技術(shù)
腺相關(guān)病毒(AAV)屬微小病毒(parvovirus)家族的成員,為無包膜的單鏈線狀DNA病毒。AAV的基因組約4700bp,包括上下游兩個開放讀碼框架(ORF),位于分別由145個核苷酸組成的2個反向末端重復序列(ITR)之間。
基因組中有3個啟動子(P5、P19和P40)和2個開放閱讀框(ORF),rep和cap,如圖1所示。rep編碼4個重疊的多功能蛋白,即Rep78、Rep68、Rep52和Rep40,其中Rep78與Rep68參與AAV的復制與整合,Rep52和Rep40具有解螺旋酶和ATP酶活性,與Rep78、Rep68共同參與單鏈基因組的復制;cap編碼的VP1、VP2、VP3、是裝配成完整病毒所需要的衣殼蛋白,它們在AAV病毒整合、復制和裝配中其重要作用。
將野生型的腺相關(guān)病毒基因組初步改造后,可包裝形成單鏈DNA AAV(single-stranded AAV, ssAAV)病毒。
雙鏈AAV病毒(self-complementary AAV,scAAV)是在ssAAV基因組右側(cè)ITR改造后,可包裝形成自身互補的雙鏈AAV病毒,基因表達更為快速,表達水平更高。
AAV感染細胞后,需要有一個由單鏈轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈的過程,病毒DNA第二鏈的合成已被證明是病毒基因表達的限速步驟,直接影響到病毒的感染效率。在scAAV基因組中,右邊的ITR刪除了一個D序列(包裝信號),并且末端解鏈位點突變(∆trs),它能夠阻止Rep蛋白修飾調(diào)節(jié)解鏈切口,增強自我互補雙鏈DNA的包裝。雙鏈AAV病毒進入細胞后,不需要一個由單鏈變?yōu)殡p鏈的過程,可以直接表達,而且表達水平相對較高。非常適合應(yīng)用在要求目的基因快速表達且需要較高表達水平的基因治療方案中。
scAAV包裝容量不能超過1.4kb。
并且百恩維生物有AAV1~9、DJ等10種血清型可供包裝選擇,能滿足客戶的各種實驗要求。
您只需給我們提供詳細的基因信息,選定的所需的血清型,我們就能為您提供高滴度的scAAV病毒,滴度高達1013vg。
另外百恩維生物經(jīng)過鑒定與質(zhì)量控制:載體測序鑒定、Q-PCR測定滴度、感染活性測定等,保證給您提供的病毒正確可靠。