microRNA表達載體構(gòu)建

　　 microRNA表達載體構(gòu)建 　　　MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，通常長為18~25nt，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結(jié)合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對基因進行轉(zhuǎn)錄后的表達調(diào)控。構(gòu)建miRNA表達載體，實現(xiàn)microRNAs在細胞中穩(wěn)定表達，能夠彌補瞬時轉(zhuǎn)染持續(xù)時間短的不足，miRNA的表達方式通常包括pri-miRNA，pre-miRNA與成熟microRNAs形式。 　　　百恩維生物有多種表達載體，如真核表達載體、各種病毒表達載體等；可選擇各種熒光報告基因，如GFP、eGFP、tdTomato、YEP等。 　　　百恩維生物提供以下兩種miRNA表達方式：（1）pri-miRNA（初級轉(zhuǎn)入產(chǎn)物）的表達形式；（2）pre-miRNA（miRNA前體）的表達形式。 　　　客戶只需提供miRNA的具體信息及指定過表達載體類型（如慢病毒載體），我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。 　　技術(shù)流程如下： 　　　1、miRNAs序列分析； 　　　2、PCR引物設(shè)計及合成； 　　　3、PCR擴增pri-miRNA序列或者單鏈互補引物退火形成pre-miRNA序列； 　　　4、將片段克隆至含有CMV強啟動子的載體上； 　　　5、測序以確保插入序列正確性； 　　　6、向客戶提交測序結(jié)果與實驗方法報告單。 　　　 服務(wù)項目 實驗周期 收費標準 miRNA 前體（pre-miRNA）表達載體構(gòu)建 1~2周 2000元 miRNA inhibitor 表達載體構(gòu)建 1~2周 2500元 初始miRNA（pri-miRNA）表達載體構(gòu)建 1~2周 3000元