shRNA表達(dá)載體構(gòu)建

shRNA表達(dá)載體構(gòu)建 　　　shRNA（short hairpin RNA, shRNA）是一段小發(fā)卡或短發(fā)卡RNA序列，一般長19~23bp，常被用于RNA干擾沉默靶基因的表達(dá)。利用載體把shRNA導(dǎo)入細(xì)胞，載體中的U6或H1啟動子確保shRNA的表達(dá)；shRNA的發(fā)卡結(jié)構(gòu)可被細(xì)胞機(jī)制切割成siRNA，然后siRNA結(jié)合到RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物上（RNA induce -d silencing complex，RISC），該復(fù)合物能夠結(jié)合到目的mRNAs并將其降解。通過載體可以將shRNA整合到細(xì)胞基因組中，從而使細(xì)胞長期穩(wěn)定表達(dá)shRNA。 　　　百恩維生物可提供多種shRNA表達(dá)載體，如慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、以及普通的真核表達(dá)載體等；同時也有多種熒光報(bào)告基因可供選擇，如GFP、eGFP、tdTomato、YEP等；另外還有藥篩基因可供選擇：Puromycin、Neomycin等，用于后期構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)shRNA的細(xì)胞株。 　　　百恩維生物可以構(gòu)建常規(guī)的1條shRNA干擾表達(dá)載體，也可在同一個表達(dá)載體中構(gòu)建多條shRNA（百恩維生物的專利技術(shù)），干擾效果更強(qiáng)。 　　　您只需告訴我們您需要干擾的目的基因，我們就會為您設(shè)計(jì)相應(yīng)高質(zhì)量的shRNA序列信息，其干擾效率保證大于70%。 　　技術(shù)服務(wù)內(nèi)容如下： 　　　1、接受客戶目標(biāo)基因信息； 　　　2、分析目標(biāo)基因，并設(shè)計(jì)高質(zhì)量的shRNA序列； 　　　3、PCR退火形成shRNA雙鏈； 　　　4、將shRNA雙鏈克隆至含有U6或H1啟動子的表達(dá)載體上； 　　　5、測序以確保插入序列的正確性； 　　　6、向客戶提交測序結(jié)果與實(shí)驗(yàn)方法報(bào)告單。