細胞凋亡

細胞凋亡 是生物體發(fā)育過程中普遍存在的，是一個由基因決定的細胞主動有序的死亡方式。具體指細胞遇到內(nèi)、外環(huán)境因子刺激時，受基因調(diào)控啟動的自殺保護措施，包括一些分子機制的誘導激活和基因編程，通過這種方式去除體內(nèi)非必需細胞。而細胞發(fā)生程序性死亡時，凋亡的細胞散在于正常組織細胞中，無炎癥反應，不遺留瘢痕。死亡的細胞碎片很快被巨噬細胞或鄰近細胞清除，不影響其他細胞的正常功能。 百恩維為您提供以下凋亡檢測服務 1）流式細胞儀檢測細胞凋亡——Annexin V/PI 雙染色法 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內(nèi)側，細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細胞膜內(nèi)轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。Annexin V是一種Ca+依賴的磷脂結合蛋白，最初發(fā)現(xiàn)是一種具有很強的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。但PS轉移到細胞膜外不是凋亡所獨特的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了， 殘廢的細胞其細胞膜通透，可被碘化丙啶，一種核酸染料染成紅色。如將Annexin V標以熒光素（RPE、FITC等）作為熒光探針，結合PI，利用熒光顯微鏡或流式細胞檢，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。 2）TUNEL法檢測細胞凋亡 TUNEL原理： 細胞凋亡中，染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3’-OH末端，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞。而正常的或正在增殖的細胞幾乎DNA的斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL法是一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品，經(jīng)過生物素標記和后續(xù)的顯色等步驟，即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。 服務流程： 確定實驗方案 客戶提供固定好的組織、細胞爬片、蠟塊或切片 檢測凋亡細胞 提供實驗結果，包括成像圖片，實驗報告及原始數(shù)據(jù)