分子與細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn)

　　百恩維生物平臺(tái)為用戶提供整體實(shí)驗(yàn)方案，包括從質(zhì)粒構(gòu)建、病毒包裝、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞感染、細(xì)胞建模以及細(xì)胞生物學(xué)功能檢測(cè)等，通過評(píng)估客戶需求，圍繞公司特色，制定特有的實(shí)驗(yàn)方案，結(jié)合現(xiàn)有平臺(tái)及擴(kuò)展平臺(tái)，利用分子細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，提供真實(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，全面滿足客戶的實(shí)驗(yàn)需求。 1 質(zhì)粒構(gòu)建 　　　提供干擾表達(dá)載體、micoRNA表達(dá)載體、以及過表達(dá)載體構(gòu)建。 2 病毒包裝 　　　提供相應(yīng)的慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒包裝。 3 RT-PCR 　　　RNA提取質(zhì)量檢測(cè)電泳圖、RT-PCR擴(kuò)增曲線示例（三重復(fù)避免系統(tǒng)誤差）、RT-PCR數(shù)據(jù)分析示例（計(jì)算組內(nèi)誤差）、RT-PCR結(jié)果柱狀圖示例（檢測(cè)干擾效率）、靶基因與內(nèi)參溶解曲線圖（檢測(cè)擴(kuò)增質(zhì)量）、DNA片段擴(kuò)增質(zhì)量檢測(cè)電泳圖等。 4 Western Blot 　　　包括蛋白電泳圖、灰度分析圖。 5 下游細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 5.1 下游靶基因表達(dá)量的鑒定 　　　常規(guī)出示的結(jié)果同樣包括：RT-PCR、Western，如果涉及分泌蛋白，可以進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)，客戶可指定檢測(cè)方法。 5.2 穩(wěn)定株篩選實(shí)驗(yàn) 　　　在藥物壓力下篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，常規(guī)出示結(jié)果包括：RT-PCR、Western，客戶可指定篩選及檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)過程：1. 含客戶目的基因慢病毒包裝：2. 細(xì)胞培養(yǎng)：感染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%；3. 藥物篩選穩(wěn)定表達(dá)株圖片，4. 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株鑒定。周期2-3個(gè)月，提供T25穩(wěn)篩細(xì)胞株一瓶或者凍存的細(xì)胞，具體價(jià)格敬請(qǐng)來電咨詢。 5.3 克隆形成率實(shí)驗(yàn) 　　　采用結(jié)晶紫或吉姆薩染色法，檢測(cè)轉(zhuǎn)入靶基因后細(xì)胞增殖情況，常規(guī)出示結(jié)果包括：克隆染色圖及柱狀分析圖。 5.4 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 　　　采用CCK8或MTT方法，檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況，使用CCK-8方法，據(jù)活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉(zhuǎn)變?yōu)殡y溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物formazan，并可被酶標(biāo)儀檢測(cè)，間接反應(yīng)活細(xì)胞數(shù)量。具體價(jià)格敬請(qǐng)來電咨詢。（包括4組細(xì)胞，每個(gè)樣品3-5個(gè)復(fù)孔，客戶可以選擇檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)。） 常規(guī)出示結(jié)果包括： 原始讀數(shù)（每個(gè)樣品5個(gè)重復(fù)） 細(xì)胞增殖曲線圖 5.5 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn) 　　　采用PI染色的方法，在流式細(xì)胞儀上對(duì)細(xì)胞樣品進(jìn)行細(xì)胞周期分析 5.6 細(xì)胞凋亡分析 　　　采用Annexin V/PI；Annexin V-PE/7-AAD或客戶自己提供合適的試劑盒，在流式細(xì)胞儀上對(duì)細(xì)胞樣品進(jìn)行細(xì)胞。 5.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Transwell） 　　　采用結(jié)晶紫或DAPI染色法，檢測(cè)細(xì)胞遷移的能力。或用CKK-8法進(jìn)行檢測(cè)�？蛻粜杼峁�：檢測(cè)細(xì)胞及其培養(yǎng)條件和處理方法。選擇觀察時(shí)間點(diǎn)。 5.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix） 　　　采用結(jié)晶紫或DAPI染色法，檢測(cè)細(xì)胞侵襲的能力，鋪有Matrigel的特殊濾膜，正常細(xì)胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑，上室加有經(jīng)過處理的重懸腫瘤細(xì)胞，具有侵襲能力的腫瘤細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下開始穿膜運(yùn)動(dòng)，并粘附在濾膜下表面。具體價(jià)格敬請(qǐng)來電咨詢。 5.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 　　　通過對(duì)劃痕部位距離差異的計(jì)算，檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 5.10 免疫熒光實(shí)驗(yàn) 　　　通過融合熒光蛋白或熒光二抗，鑒定目標(biāo)蛋白細(xì)胞內(nèi)定位，利用抗原－抗體特異性結(jié)合的原理，用經(jīng)熒光染料標(biāo)記的抗體對(duì)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性或定量研究的方法。流程：細(xì)胞爬片、轉(zhuǎn)染或藥物處理、固定透化、封閉、一抗孵育、熒光二抗孵育、熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗，具體價(jià)格敬請(qǐng)來電咨詢。 5.11 粘附實(shí)驗(yàn)部分 　　　本平臺(tái)是借助CCK8試劑盒可以檢測(cè)活細(xì)胞的功能，檢測(cè)不同處理組間的粘附差異。 5.12 酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）4步驟幫您輕松檢驗(yàn)各種蛋白大分子抗原 　�。�1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。（2）加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)，去除未結(jié)合物質(zhì)。（3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫標(biāo)抗體結(jié)合。（4）加底物顯色。服務(wù)價(jià)格：檢測(cè)3-5組樣品，每組樣品3個(gè)復(fù)孔，具體價(jià)格敬請(qǐng)來電咨詢。