細胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡的原理
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實驗原理
細胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。
細胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡的原理:磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serine, PS)正常位于細胞膜的內(nèi)側(cè),但在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進行EGFP融合、熒光素(FITC、PE)或biotin標記,以標記了的Annexin-V作為熒光探針。
實驗流程
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