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螢光素酶報(bào)告基因分析。
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Luciferase報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測(cè)螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測(cè)定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件克隆在luciferase的上游或其他適當(dāng)?shù)牡胤�，�?gòu)建成報(bào)告基因質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測(cè)定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對(duì)感興趣的調(diào)控元件的影響。
實(shí)驗(yàn)中螢火蟲螢光素酶與基因表達(dá)的特定實(shí)驗(yàn)條件相關(guān)，海腎螢光素酶用來做轉(zhuǎn)染的內(nèi)參，以校正不同樣品之間轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。螢火蟲螢光素酶和海腎熒光素酶不需要翻譯后修飾即具有生物活性，一旦翻譯完成即具有報(bào)告基因的功能。通過加入特定的螢光素酶底物，螢光素酶與底物反應(yīng)過程中會(huì)發(fā)出生物螢光，然后可以通過螢光測(cè)定儀測(cè)定反應(yīng)過程中釋放的生物螢光。
應(yīng)用領(lǐng)域
（1） 啟動(dòng)子活性分析及檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控狀態(tài)。
（2） 結(jié)合定點(diǎn)基因突變等方法確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。
（3） 信號(hào)通路活性分析，通過檢測(cè)某個(gè)信號(hào)通路的下游轉(zhuǎn)錄因子的活性來監(jiān)測(cè)信號(hào)通路的活性；
（4） 體內(nèi)（腫瘤）細(xì)胞示蹤分析。
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