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細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖、遺傳的基礎(chǔ)，是細(xì)胞最基本的生理活動。生長因子、激素及癌基因產(chǎn)物等均可誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖或抑制細(xì)胞的增殖，通過影響細(xì)胞周期的運行、細(xì)胞凋亡的改變而實現(xiàn)。
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| 細(xì)胞增殖及相關(guān)服務(wù) |
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服務(wù)流程
服務(wù)說明
MTT檢測細(xì)胞增殖 MTT為一種化合物，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide。MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法，其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在 490nm波長處測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，因此MTT的吸光值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已廣泛用于抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。吉凱實驗實例： 不同基因的過表達慢病毒感染細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)三天后，收集對數(shù)期細(xì)胞，向96孔板每孔加入2000個細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育至細(xì)胞貼壁,向孔板中加入MTT溶液，并繼續(xù)培養(yǎng)4h。最后去除MTT，加入二甲基亞砜溶解MTT，酶標(biāo)儀讀取OD490時的吸光值。  CON：未處理細(xì)胞實驗組； NC：對照慢病毒感染實驗組； OE：目的基因過表達慢病毒感染實驗組。 結(jié)論：目的基因過表達后，細(xì)胞生長受到抑制。 收費標(biāo)準(zhǔn)：2250元/組，MTT檢測在96孔板中進行，60孔為一組實驗。
克隆形成實驗 是測定細(xì)胞的增殖能力的有效方法之一。單個細(xì)胞在體外持續(xù)6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群稱為克隆。這時每個克隆含有50個以上的細(xì)胞，大小在0.3~1.0mm之間，通過計數(shù)克隆形成率，可對單個細(xì)胞的增殖潛力做定量分析，了解細(xì)胞的增殖能力和獨立生存能力。常用的方法有：平板克隆形成實驗和軟瓊脂形成實驗。吉凱基因?qū)嶒瀸嵗?/strong> 1、平板克隆形成：分別將陰性對照靶點和目的基因有效靶點慢病毒感染細(xì)胞，四天后，將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞消化，計數(shù)后在6孔板培養(yǎng)板中接種500個細(xì)胞/孔，靜置培養(yǎng)2周，中途隔3天換液并觀察細(xì)胞狀態(tài)，出現(xiàn)肉眼可見的克隆即終止培養(yǎng)，用多聚甲醛固定1h，再用Giemsa染色后，計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆。得到的實驗結(jié)果如下：  實驗結(jié)論：感染了目的基因靶點病毒的細(xì)胞，克隆形成能力減弱。 2、軟瓊脂克隆形成：分別將陰性對照靶點和目的基因有效靶點慢病毒感染細(xì)胞，四天后，將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞消化；在孔板底部鋪0.6%的瓊脂糖，上層使用0.3%的瓊脂糖和細(xì)胞的混液，置入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)10天。把平皿放置在倒置顯微鏡下，觀察細(xì)胞克隆數(shù)。得到的實驗結(jié)果如下：  實驗結(jié)論：感染了目的基因靶點病毒的細(xì)胞，克隆形成能力減弱。 收費標(biāo)準(zhǔn)：375元/well。
細(xì)胞周期 指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期測定細(xì)胞周期的方法很多，最常用的是PI滲入測定細(xì)胞周期。PI ,即碘化丙錠,可以與細(xì)胞內(nèi)DNA 和RNA 結(jié)合,采用RNA酶將RNA消化后,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測到的與DNA 結(jié)合的PI 的熒光強度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。由于細(xì)胞周期各時相的DNA 含量不同,通常正常細(xì)胞的 G0/G1 期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N) ,而G2/ M 期具有四倍體細(xì)胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。因此,通過流式細(xì)胞術(shù)PI染色法對細(xì)胞內(nèi)DNA 含量進行檢測時,可以將細(xì)胞周期各時相區(qū)分為 G0/G1 期,S 期和G2/ M 期,并可通過特殊軟件計算各時相的百分率。應(yīng)用實例 分別將陰性對照靶點和目的基因有效靶點慢病毒感染細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)四天后，洗滌消化并用預(yù)冷的70% 乙醇溶液固定細(xì)胞，1h后，PI染色，流式細(xì)胞儀檢測，得到的周期實驗結(jié)果如下：  實驗結(jié)論：感染目的基因靶點病毒后，細(xì)胞處于G1期的細(xì)胞顯著增加，處于S期的細(xì)胞顯著減少，提示目的基因與細(xì)胞的周期分布顯著相關(guān)。 收費標(biāo)準(zhǔn)：375元/well。
細(xì)胞凋亡 是指細(xì)胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的，高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。細(xì)胞凋亡的過程大致可分為以下幾個階段：接受凋亡信號→凋亡調(diào)控分子間的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→進入連續(xù)反應(yīng)過程。
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