HCS工程細(xì)胞株簡(jiǎn)介

 

簡(jiǎn)介

一些特定的信號(hào)通路基因，如MK2，SMAD2，NF-KB等，由于其強(qiáng)大的生物學(xué)功能，在藥物篩選和基礎(chǔ)科研中，發(fā)揮了極大的作用。通過構(gòu)建出其工具細(xì)胞株，我們可以快速，簡(jiǎn)潔的將其應(yīng)用到特定靶點(diǎn)的藥物篩選，特定信號(hào)通路的機(jī)制研究中，大大加速研究進(jìn)程，并且獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)結(jié)果�；�于此，我們針對(duì)一些關(guān)鍵基因，通過對(duì)其的狀態(tài)分析，構(gòu)建了一系列工具細(xì)胞株，提供給基礎(chǔ)與研發(fā)工作者。

原理 
挑選特定的功能基因，將其構(gòu)建為外源融合蛋白，使其和GFP蛋白融合，然后在工具細(xì)胞內(nèi)，穩(wěn)定的表達(dá)。挑選的基因編碼的蛋白，是激活后分布狀態(tài)有變化的基因。在特定的藥物刺激，或者別的蛋白作用下，該融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置會(huì)發(fā)生改變，我們通過采集圖像，分析蛋白的表達(dá)和分布，來確定那些藥物或者基因能激活或者抑制該信號(hào)通路。

實(shí)例

MK2工具細(xì)胞 
MK2蛋白和EGFP融合，在IL-1或者TNFa的刺激下，該蛋白會(huì)從細(xì)胞核排出進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，而在IL-1或者TNFa抑制劑的作用下，重新入核。

應(yīng)用

     1，特異靶點(diǎn)藥物篩選與研究
     2，信號(hào)通路研究 
 

現(xiàn)有產(chǎn)品

1. 細(xì)胞名:MK2

細(xì)胞類型:U2OS
外源蛋白: human MAPKAPK2 (MK2) isoform 2 (GenBank Acc.NM_032960) fused to the C-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin
應(yīng)用:TNFα, IL-6, and IL-1介導(dǎo)的免疫應(yīng)激
 
 

2. 細(xì)胞名:smad2

細(xì)胞類型:MDA-MB-468
外源蛋白: human Smad2 (GenBank Acc. NM_005901)fused to the C-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin
應(yīng)用: TGFβ相關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)，分化和調(diào)亡

3. 細(xì)胞名:CB1

細(xì)胞類型:U2OS
外源蛋白: human Cannabinoid receptor 1 (CB1) (GenBank Acc.NM_016083) fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin
應(yīng)用: GPCR信號(hào)通路

4．細(xì)胞名:RAC1

細(xì)胞類型:CHO
外源蛋白: human Pak1(67-166)-EGFP (Pak1RBD-EGFP)(GenBank Acc. NM_002576) fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein(EGFP) and Ha-tagged human Rac1 (GenBank Acc. NM_006908).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin & zeocin
應(yīng)用:RAS信號(hào)，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞周期，細(xì)胞骨架組裝

5. 細(xì)胞名:M2.PKA

細(xì)胞類型:CHO_K1
外源蛋白: muscarinic acetylcholine receptor 2 (M2)(GenBank Acc. NM_001006630) and the catalytic domain of human Protein Kinase A (PKAcat)(GenBank Acc. NM_002730) fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein(EGFP).
啟動(dòng)子:CMV    抗性：geneticin & zeocin
應(yīng)用: GPCR信號(hào)通路

6. 細(xì)胞名:M3.NFATc1

細(xì)胞類型:U2OS
外源蛋白: human muscarinic acetylcholine receptor 3 (M3)(GenBank Acc. NM_000740) and human NFATc1 (GenBank Acc. NM_172389) fused to the C-terminusof enhanced green fluorescent protein (EGFP)..
啟動(dòng)子:CMV   抗性：geneticin & zeocin
應(yīng)用: GPCR信號(hào)通路

7. 細(xì)胞名:AKT1

細(xì)胞類型:CHO_hIR
外源蛋白: human Akt1 (GenBank GeneID: 207) fused to the C-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV   抗性：geneticin
應(yīng)用: 生長(zhǎng)因子，趨化因子的下游信號(hào)通路
 

8．細(xì)胞名:M1.NFATc1

細(xì)胞類型:U2OS
外源蛋白: human muscarinic acetylcholine receptor 1 (M1)(GenBank Acc. NM_000738) and human NFATc1 (GenBank Acc. NM_172389) fused to the C-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin & zeocin      
應(yīng)用: GPCR信號(hào)通路

9. 細(xì)胞名:NFKB

細(xì)胞類型:U2OS
外源蛋白: human NFκB (GenBank Acc. NM_021975) fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (EGFP).
啟動(dòng)子:CMV  抗性：geneticin      
應(yīng)用: 腫瘤炎癥相關(guān)信號(hào)
 




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