實時熒光定量PCR,絕對定量,相對定量,SYBR法,TaqMan探針法
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熒光定量PCR服務
熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時監(jiān)控反應過程。隨著PCR 反應的進行,反應產(chǎn)物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一次熒光強度信號,這樣就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,結合相應的軟件對產(chǎn)物進行分析,可以得到熒光擴增曲線,計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍,運用該項技術,可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、絕對定量和定性分析。
服務項目
1.相對定量
包括RNA提取、反轉錄和擴增,采用SYBR Green I法和TaqMan探針法兩種方式,一般采用2-ΔΔ Ct 法進行計算。每個樣本重復三次,一般情況我公司提供內參基因引物。
2.絕對定量
需要制備標準品并建立標準曲線,然后檢測目的樣本中的基因,比對標準曲線得到基因準確拷貝數(shù)
服務編號
服務編號 | 服務項目 | 內容說明 | 周期 |
RTP01 | 相對定量SYBR法 | 包括反轉錄和上機檢測、 數(shù)據(jù)分析 |
1-4周 |
RTP02 | 相對定量TaqMan探針法 | 探針合成需另外計費 | 2-4周 |
RTP03 | 絕對定量SYBR法 | 不包括標準品制備 | 1-4周 |
RTP04 | 絕對定量TaqMan探針法 | 探針合成需另外計費 | 2-4周 |
RTP05 | 構建標準品 | 擴增、載體構建和濃度滴定 | 2周 |
RTP06 | 引物設計與合成 | 專用于熒光定量的引物 | 1-2周 |
送樣要求
細胞(≥106 )、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、葉片(≥100mg)等樣品材料,基因組DNA或總RNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。
提供結果
引物和探針及序列,反轉錄膠圖,原始數(shù)據(jù)(包括擴增曲線和熔解曲線)、數(shù)據(jù)分析結果及實驗報告。
成功案例