iTRAQ

產(chǎn)品定義

iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技術(shù)是由美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司ABI研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4種或8種同位素的標(biāo)簽，通過特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)，然后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質(zhì)的相對含量。

技術(shù)原理

iTRAQ試劑由三部分組成：報告基團(tuán)、質(zhì)量平衡基團(tuán)和肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán)，形成4種或8種相對分子質(zhì)量均等量（145或305）的異位標(biāo)簽。

iTRAQ試劑組成圖（以4-plex為例）

iTRAQ試劑用于標(biāo)記酶解后的肽段。在質(zhì)譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一肽段表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。在串聯(lián)質(zhì)譜中，報告基團(tuán)、質(zhì)量平衡基團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂，質(zhì)量平衡基團(tuán)丟失，帶不同同位素標(biāo)簽的同一多肽產(chǎn)生不同的報告離子，根據(jù)報告離子的信號強度值可獲得樣品間相同肽段的定量信息，再經(jīng)過軟件處理得到蛋白質(zhì)的定量信息。

實驗流程

注釋：“樣品及實驗預(yù)判”包括定量、SDS-PAGE測試、酶解和質(zhì)譜分析，對樣品質(zhì)量及樣品之間的平行性進(jìn)行初步判斷。

使用儀器

             Thermo Scientific Q Exactive                AB Sciex TripleTOF^TM 5600

技術(shù)優(yōu)勢

可同時對2-8種不同條件樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)差異分析。

適合廣泛樣品類型：胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。

與凝膠分離的蛋白質(zhì)定量技術(shù)相比，iTRAQ質(zhì)譜定量技術(shù)可檢測到更多類型的蛋白質(zhì)分子，如低豐度蛋白質(zhì)、強酸（堿）性蛋白質(zhì)、<10KD或>100KD的蛋白質(zhì)分子。

應(yīng)用領(lǐng)域

疾病標(biāo)志物篩選                              作用機制研究

植物抗逆研究                                 藥物作用靶點研究

特殊功能蛋白質(zhì)篩選

樣品要求