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首次應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，為全面、系統(tǒng)地定性和定量分析復(fù)雜哺乳動物細(xì)胞蛋白質(zhì)組提供了有效的解決方案。
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產(chǎn)品定義
細(xì)胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC），這種方法首先是由2002年丹麥Mann實(shí)驗(yàn)室的Ong等對AACT技術(shù)作了進(jìn)一步改進(jìn)而獲得，并首次應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，為全面、系統(tǒng)地定性和定量分析復(fù)雜哺乳動物細(xì)胞蛋白質(zhì)組提供了有效的解決方案。
技術(shù)原理
分別用天然同位素（輕型）或穩(wěn)定同位素（重型）標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)5-6代倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸完全摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白質(zhì)按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
實(shí)驗(yàn)流程
注釋：“SDS-PAGE分級”處也可選擇酶解后在肽段水平進(jìn)行分級。
使用儀器
Thermo Scientific Q Exactive
技術(shù)優(yōu)勢
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)摻入標(biāo)記，減小實(shí)驗(yàn)誤差，定量更準(zhǔn)確。
應(yīng)用領(lǐng)域
疾病標(biāo)志物篩選 作用機(jī)制研究
藥物作用靶點(diǎn)研究 特殊功能蛋白質(zhì)篩選
樣品要求
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樣品類型 |
樣品要求（/組樣品） |
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蛋白質(zhì)提取物 |
濃度>1μg/μl，蛋白質(zhì)總量 >300μg |
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細(xì)胞樣品 |
細(xì)胞量>107 |
技術(shù)參考案例
[1] Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(30): 12414-9.
[2] Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun. 2014; 5: 3319.
[3] Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.
