平板等電聚焦

——即平板等電聚焦技術服務

蛋白質(zhì)藥物等電點測試原理：兩性電解質(zhì)在電泳場中形成pH梯度，由于蛋白質(zhì)為兩性化合物，其所帶的電荷與介質(zhì)pH指有關，帶點蛋白質(zhì)在電泳中向極性相反的方向遷移，當?shù)竭_其等電點時，電流達到最小，蛋白質(zhì)不再移動，此處的pH值為該蛋白質(zhì)樣品的等電點，與標準品對比后可以進行定量計算，獲取蛋白質(zhì)樣品的等電點參數(shù)。

“平板等電聚焦測定蛋白質(zhì)的等電點，是中國藥典中規(guī)定的方法”

技術指標

■  樣品要求：

測試樣品中盡可能無鹽或低鹽；樣品純度在90%以上

■  儀器設備：

MultiphorⅡ Electrophoresis System (GE Healthcare)：內(nèi)置陶瓷冷卻板（260×200 mm）與循環(huán)水直接相連，電泳膠直接置于冷卻板上，溫控效果好。

EPS 3501 XL Power Supply（GE Healthcare）：輸出電壓（0-3500V）；輸出電流（0-400mA）；輸出功率（0-200W）；恒壓、恒流、恒功率之間可以自動切換。

案例分析

樣品名稱：重組XXXXXXXX蛋白

樣品批號：XXXXXXXXXXXXXX

平板等電聚焦電泳試驗參數(shù)：上樣量10μg

冷凝溫度：9℃

電泳程序：預電泳700V 20min；500V 20min；200V 90min。

結果圖片：

Q&A

1. 蛋白質(zhì)的平板等電聚焦和毛細管等電聚焦方法比較。

平板等電聚焦具有分辨率高、重復性好、樣品用量大、操作簡便迅速等優(yōu)點。而毛細管等電聚焦相對于平板等電聚焦來說具有耗時短、樣品用量少、易于自動化等諸多優(yōu)點，但相對設備較為昂貴，單次測試費用較高。

1. 平板等電聚焦在蛋白質(zhì)類藥物理化性質(zhì)分析中的地位。

等電點時蛋白質(zhì)最基本和重要的理化參數(shù)，而平板等電聚焦是測試蛋白質(zhì)等電點的主要技術手段。由于平板等電聚焦的分辨率高、重復性好、操作簡便迅速，在生物化學、分類學、分子生物學及臨床醫(yī)學研究等諸方面，都得到廣泛應用。