Western blot

簡介

  免疫印跡immunoblotting又稱蛋白質(zhì)印跡western blot，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。Western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。Western blot常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。 
  仁源生物為您提供標(biāo)準(zhǔn)western blot技術(shù)服務(wù)（自備一抗或由仁源生物代購）。并對band進(jìn)行灰度分析，得出蛋白表達(dá)相對定量結(jié)果。

原理

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋 白水平的表達(dá)。

送樣要求

需新鮮或正確保存的蛋白樣品或者蛋白粗提液
陽性對照樣品（如果有）
檢測目的蛋白的一抗（或仁源生物代購）
組織樣品不少于50mg
細(xì)胞不少于5×106個
總蛋白濃度不低于 2μg/μl（至少50μl）

服務(wù)流程

蛋白提取和定量（如果提供蛋白樣品，則直接電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測抗體特異性）
SDS-PAGE 10-15% 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
轉(zhuǎn)膜（PVDF膜）
封閉 （5%脫脂奶粉）
一抗孵育（其中內(nèi)參基因?yàn)镚apdh或Actin）
二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成實(shí)驗(yàn)無法繼續(xù)，則收取相關(guān)預(yù)實(shí)驗(yàn)費(fèi)用）
顯色（ECL）
曝光、洗片、灰度分析

提供結(jié)果

蛋白濃度
膠片
膜
灰度分析（如果需要）
實(shí)驗(yàn)報(bào)告

結(jié)果實(shí)例