慢病毒包裝

當(dāng)代基因治療研究的熱門方法是將外源基因DNA或RNA片段導(dǎo)入靶細胞或組織，研究靶基因的上調(diào)或抑制情況。例如，有些異�；�因（癌基因、病毒基因），可通過反義核酸技術(shù)引入外源片段將其抑制；有些基因本身有治療作用，體外合成該基因?qū)�入體內(nèi)使其表達豐度提高。

常用的幾種病毒載體的區(qū)別

病毒載體已成為當(dāng)前基因治療載體研究的熱點，其優(yōu)勢在于：

1、病毒包裝技術(shù)經(jīng)歷了多年的研究，已趨于成熟，可用于產(chǎn)業(yè)化大量生產(chǎn)
2、病毒基因組的結(jié)構(gòu)簡單、分子背景比較清楚，穩(wěn)定易于改造、易于制備
3、病毒的宿主范圍廣，且具有高效的靶向特異性
4、在目的基因表達方面相對于脂質(zhì)體介導(dǎo)的效果更明顯、長時、穩(wěn)定
5、通過載體改造的方式形成了復(fù)制缺陷型結(jié)構(gòu)，安全性高

慢病毒（Lentivirus） 載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。作為快速有效的遺傳物質(zhì)投遞工具，慢病毒的應(yīng)用在生物醫(yī)療研究領(lǐng)域已廣泛流行。

特點

1、區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，常用于感染難轉(zhuǎn)染的細胞，如原代細胞、神經(jīng)元細胞、干細胞、不分化細胞、心肌細胞、肝細胞、內(nèi)皮細胞、腫瘤細胞，且效率近100%
2、可裝載DNA片段容量高達6kb
3、目的基因進入到宿主細胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，形成穩(wěn)定遺傳物質(zhì)，使得目的基因在細胞中可穩(wěn)定長期表達。
4、病毒載體顆粒通過包裝元件和含病毒基因組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細胞系。利用逆轉(zhuǎn)錄機制構(gòu)建自我失活(SIV)的HIV-1來源的載體,一旦轉(zhuǎn)移到靶細胞后,它就喪失了病毒長末端重復(fù)的轉(zhuǎn)錄能力,減少了產(chǎn)生重組病毒的機會,并避免了與啟動子干擾的問題。

綜上特點決定了其應(yīng)用

用慢病毒載體攜帶目的基因比用質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染更適于穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建
載體帶有可進行高效率的包裝、轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定整合進靶細胞的基因組中的序列元件，其產(chǎn)生滴度更高，為活體動物模型實驗提供高性價比的包含目的基因的病毒液
其高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及整合到基因組的特點為RNAi和cDNA 克隆以及報告基因的研究提供了一個有利的途徑

慢病毒包裝服務(wù)流程

1、制備DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物
2、轉(zhuǎn)染工具細胞：通常使用293T細胞
3、收獲病毒
4、去除蛋白等雜質(zhì)
5、檢測滴度

服務(wù)提供

1、不少于1ml慢病毒包裝產(chǎn)物
2、滴度不低于108
3、提供對照載體
4、提供包含實驗過程和中間結(jié)果的詳細技術(shù)報告

注意要點

1、包裝好的病毒可以根據(jù)用戶要求感染目的細胞
2、RNA干擾慢病毒提供三條不同的shRNA序列

服務(wù)周期

3-6周