RNAi (RNAinterference, RNA干擾)技術(shù),即將與內(nèi)源 mRNA 編碼區(qū)同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(double s`tranded RNA )導(dǎo)入細胞中,通過一系列細胞內(nèi)反應(yīng)引發(fā)細胞中相應(yīng) mRNA 的降解,從而導(dǎo)致特定基因表達沉默的一種技術(shù)。RNAi的作用提供了一種經(jīng)濟、快捷、高效的抑制特異基因表達的技術(shù)手段,有助于研究該基因在生物模型系統(tǒng)中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段
siRNA構(gòu)建技術(shù)服務(wù)
本公司提供siRNA 載體的構(gòu)建服務(wù),siRNA 載體可以在細胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出shRNA ,其干擾效果等同于siRNA ,而且能夠解決 siRNA干擾時間短的缺點。您只需提供需干擾基因的詳細信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所屬物種,本公司負責設(shè)計3條針對目的mRNA的siRNA 靶序列,在短時間內(nèi)構(gòu)建三個可用于目的mRNA干擾實驗的siRNA 載體?梢詾槟(jié)省大量的時間與精力。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進行長期基因沉默研究的方法。
閃晶生物siRNA載體構(gòu)建服務(wù)程序:
1. siRNA表達載體的選用:
本公司選用的siRNA 表達載體含新霉素抗性基因和GFP綠色螢光標記,可以建立穩(wěn)定表達系,同時可以實時監(jiān)測載體在細胞中的轉(zhuǎn)染效率。載體中還含有Amp抗性基因,可以無限擴增。
2. 設(shè)計siRNA靶序列
A 、根據(jù)目的mRNA序列,設(shè)計3條RNA干擾靶序列,靶序列一般為19 - 21nt 長。
B 、對于每條選定的siRNA 靶序列,設(shè)計 siRNA 正義鏈和反義鏈,以 loop(9nt) 相連,稱為 shRNA(short hairpin RNA)。
C、陰性對照的設(shè)立.
3. 合成模板:
合成每條編碼 shRNA的DNA 模板的兩條單鏈,退火 DNA 單鏈得到 shRNA 的 DNA 雙鏈模板。模板鏈后面接有RNA PolyIII聚合酶轉(zhuǎn)錄中止位點,同時兩端分別設(shè)計 BamHI 和 HindIII 酶切位點,可以克隆到 siRNA 載體多克隆位點的 BamHI 和 HindIII 酶切位點之間。
4. siRNA 空載體用BamHI和HindIII雙酶切后,1 %瓊脂糖凝膠電泳,回收線性載體。
5. 連接與轉(zhuǎn)化:
把退火的DNA模板雙鏈連接到線性載體中。采用T4連接酶,插入片斷與載體的摩爾比約為 3 : 1 。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌,在LB Amp培養(yǎng)基上涂板,37 ℃培養(yǎng)過夜。
6. PCR 鑒定
7. 測序鑒定
8.柱抽提陽性克隆載體并定量。
收費標準 siRNA載體構(gòu)建訂單下載 個數(shù)
價格(¥)
時間
1-3個siRNA表達載體構(gòu)建
1800.00/個
14個工作日
4-10個siRNA表達載體構(gòu)建
1500.00/個
20個工作日
10個以上
協(xié)商
協(xié)商
閃晶生物同時提供腺病毒和慢病毒載體的構(gòu)建服務(wù),5000.00元/個.
聯(lián)系電話:021-54460831-11 E-mail: lou800624@163.com 乘車路線:火車站坐1號地鐵到終點,然后換乘5號線到北橋站即可。
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http://www.shinegene.org.cn/service/sirna.html
bio-equip.com
上海閃晶分子生物科技有限公司,座落在上海閔行區(qū),紫竹科技園;毗鄰上海交大、華東師范大學(xué),及國際知名跨國公司,學(xué)術(shù)氛圍濃郁,具有得天獨厚的人文環(huán)境。公司擁有1400平方實驗大樓,配備有齊全的研發(fā)、實驗設(shè)備,以滿足日益增長的國內(nèi)外客戶需求,是專業(yè)從事生物技術(shù)服務(wù)的公司;公司擁有一批知名度較高的學(xué)科帶頭人和一支訓(xùn)練有素、多學(xué)科配合、以中青年科技人員為主的研究隊伍。公司自研究所改制以來在分子生物學(xué)試劑盒、熒光定量PCR、siRNA載體構(gòu)建、全基因合成、熒光探針修飾、多肽合成、dNTP、Pfu酶、熱啟動Taq酶、DNA marker、基因工程、原生質(zhì)體的培養(yǎng)、細胞融合、單克隆抗體診斷試劑、細胞培養(yǎng)、細胞轉(zhuǎn)染、病毒構(gòu)建包裝、Western Blot 、蛋白表達純化等研究方向作了深入的研究;
公司擁有從事基因工程、細胞工程、單克隆抗體研究的現(xiàn)代化實驗室和先進的精密設(shè)備,如:實時PCR 擴增儀、多肽合成儀、 DNA 合成儀、 DNA 序列分析儀、 FPLC 、高壓液相色譜儀、凍干機、 CO2 培養(yǎng)箱、大型搖床等。
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