實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),使用熒光雜交探針,利用熒光信號累積監(jiān)測PCR的擴增效率,用以精確定量起始模板數(shù),通過內(nèi)外參對特定DNA序列進行定量分析。
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實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),使用熒光雜交探針,利用熒光信號累積監(jiān)測PCR的擴增效率,用以精確定量起始模板數(shù),通過內(nèi)外參對特定DNA序列進行定量分析。
儀器:
ABI 7500,通量達 96 個樣品。
• SYBR GREEN法:加入SYBR熒光染料,特異性滲入DNA雙鏈,發(fā)射熒光信號,從而監(jiān)測PCR產(chǎn)物的同步增加。
• Taqman探針法:設(shè)計特異性探針,擴增時,Taq酶的外切酶活性將探針酶切降解,使淬滅基團與熒光基團分離,從而監(jiān)測到報告熒光基團的信號,即實現(xiàn)監(jiān)測PCR產(chǎn)物增加的效果。
• 基因表達(mRNA、miRNA、lncRNA的定量檢測)
• 基因分型(TaqMan MGB雙探針法)