人腦動(dòng)脈血管組織提取物的背景與應(yīng)用！

                                       人腦動(dòng)脈血管組織提取物的背景與應(yīng)用！
 

一、背景
 
人腦動(dòng)脈血管組織提取物來自新鮮或冷凍人腦動(dòng)脈血管組織可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。人腦動(dòng)脈血管維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。
 
腦血管結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1）腦外動(dòng)脈屬于肌型動(dòng)脈，內(nèi)彈力膜較厚，中膜及外膜較薄，彈力纖維較少，動(dòng)脈搏動(dòng)幅度較小，增厚的內(nèi)膜可緩沖動(dòng)脈對(duì)管壁的沖擊，對(duì)腦起保護(hù)作用。腦外血管神經(jīng)豐富，大的血管外膜有神經(jīng)纖維束伴行，與血管收縮及舒張有關(guān)。2）腦動(dòng)脈可分為中央支與皮質(zhì)支，均垂直進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)，二者在腦內(nèi)有廣泛的吻合支。3）血液與腦組織間存在血腦屏障（BBB），它由腦的連續(xù)毛細(xì)血管內(nèi)皮及其細(xì)胞間緊密連接、完整的基膜、周細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞腳板圍成的神經(jīng)膠質(zhì)膜構(gòu)成，內(nèi)皮是BBB的主要結(jié)構(gòu)。4）腦靜脈壁薄，既無平滑肌又無瓣膜，腦靜脈血管缺乏收縮功能。椎動(dòng)脈、鎖骨下動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)，包括椎動(dòng)脈的寰椎動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈的枕動(dòng)脈吻合；鎖骨下動(dòng)脈的頸深動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈的枕動(dòng)脈吻合；左右頸深動(dòng)脈間及左右枕動(dòng)脈間吻合。各腦動(dòng)脈終末支吻合，包括大腦前-大腦中動(dòng)脈終末支間吻合，大腦前-大腦中-大腦后動(dòng)脈終末支間吻合形成的側(cè)支循環(huán)。
 
二、應(yīng)用
 
用于腦動(dòng)靜脈畸形臨床病理與血管平滑肌細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)研究：
 
腦動(dòng)靜脈畸形栓塞治療后的組織病理及免疫組化研究目的分析人腦動(dòng)靜脈畸形（CAVM）栓塞治療后的組織病理變化。方法對(duì)11例行血管內(nèi)栓塞治療術(shù)后再作手術(shù)切除的CAVM的病理資料進(jìn)行分析，并應(yīng)用增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、骨橋蛋白（OPN）、α—平滑肌肌動(dòng)蛋白（α—SMA）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析。
 
結(jié)果栓塞治療后，CAVM血管腔內(nèi)出現(xiàn)不同程度的血管內(nèi)、外的炎性反應(yīng)。表現(xiàn)為管壁及管周的淋巴細(xì)胞浸潤、管腔內(nèi)的內(nèi)膜增生和異物巨細(xì)胞聚集等。部分被栓塞的血管腔內(nèi)出現(xiàn)血管再通；免疫組化分析表明，新生內(nèi)膜中SMA陽性染色，表明血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）參與新生內(nèi)膜的形成；OPN在新生內(nèi)膜及異物巨細(xì)胞中有強(qiáng)陽性表達(dá)；畸形血管團(tuán)周圍組織中發(fā)現(xiàn)異常微血管，其內(nèi)皮細(xì)胞PCNA陽性染色率高，并且VEGF呈陽性染色，表明有活躍的血管生成。栓塞治療后，畸形血管周圍組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖指數(shù)（19.6±8.4，％）高于作為對(duì)照組的出血性CAVM患者（10.1±6.2，％），差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論栓塞材料引起血管不同程度的炎性反應(yīng)，適度的血管反應(yīng)有助于管腔的閉塞；栓塞的血管部分有再通現(xiàn)象；栓塞治療后畸形血管團(tuán)周邊有微血管增生跡象。
 
VSMC是血管壁最主要的細(xì)胞成分，其生物學(xué)行為與CAVM的病理狀態(tài)關(guān)系密切。本研究旨在建立一個(gè)穩(wěn)定的人CAVM血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)體系，以作為體外研究的細(xì)胞學(xué)模型。
1、方法：取手術(shù)切除的人CAVM組織塊用膠原酶消化法接種于鋪有膠原底層的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng)，并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、免疫組化染色及透射電鏡等一系列細(xì)胞定性研究。
2、結(jié)果：接種后6-8d后可見即可見少量細(xì)胞貼壁，原代培養(yǎng)的細(xì)胞呈長梭形，具有“峰”、“谷”樣生長特征；免疫組化顯示95％以上的細(xì)胞為SMA陽性染色，而CD34陰性染色；透射電鏡檢查發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞具有肌絲及密斑等結(jié)構(gòu)。從不同角度鑒定了所獲細(xì)胞具有CAVM的特征，而且細(xì)胞純度較高。細(xì)胞可以連續(xù)傳代。
3、結(jié)論：應(yīng)用酶消化法可獲得純化的血管平滑肌細(xì)胞，細(xì)胞可以連續(xù)傳代培養(yǎng)。體外CAVM的血管平滑肌細(xì)胞可作為細(xì)胞學(xué)模型用于深入研究。
 
不同培養(yǎng)條件對(duì)體外腦動(dòng)靜脈畸形VSMC增殖和遷移的影響目的研究不同培養(yǎng)條件對(duì)體外CAVM的血管VSMC增殖、遷移的影響。方法應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長曲線、MTT法檢測(cè)堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）對(duì)體外培養(yǎng)的人CAVM的VSMC增殖的影響，并應(yīng)用用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及免疫印跡的方法分別檢測(cè)它對(duì)VSMC表達(dá)骨橋蛋白（OPN）基因和蛋白的影響；用細(xì)胞遷移模型觀察骨橋蛋白對(duì)VSMC遷移能力的影響。結(jié)果：細(xì)胞計(jì)數(shù)分析表明，bFGF作用于VSMC后，細(xì)胞增殖明顯加速。
 
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