細胞培養(yǎng)基的種類與應用！百歐博偉生物

                                               細胞培養(yǎng)基的種類與應用！
 
經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應用如下：
 
1、BME細胞培養(yǎng)基
基礎Eagle培養(yǎng)基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle設計，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡單、便于添加，適于各種傳代細胞系和特殊研究用，在此基礎上改良的細胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。
 
2、MEM細胞培養(yǎng)基
又稱低限量Eagle培養(yǎng)基（Minimal Essential Medium），1959年在Eagle's基礎培養(yǎng)基（BME）上修改而來，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細胞單層生長，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基，但因其營養(yǎng)成分所限，針對生產(chǎn)之特定細胞培養(yǎng)與表達時，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟的培養(yǎng)基。
 
3、DMEM細胞培養(yǎng)基
DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，起初是為小鼠成纖維細胞設計的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。
低糖適于依賴性貼壁細胞培養(yǎng)，特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng)，也適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)。例如CHO細胞表達生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細胞表達EPO。
 
4、IMDM細胞培養(yǎng)基
Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium，用于培養(yǎng)紅細胞和巨噬細胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞，LPS刺激的B細胞，骨髓造血細胞，T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液，因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養(yǎng)。
 
5、RPMI-1640細胞培養(yǎng)基
Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對淋巴細胞培養(yǎng)設計，含BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等�，F(xiàn)也用于懸浮細胞培養(yǎng)，如哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞，雜交瘤細胞的培養(yǎng)，其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。
 
6、HamF10細胞培養(yǎng)基
1963年Ham設計，含微量元素，可在血清含量低時用，適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉鼠、人二倍體細胞，特適于羊水細胞培養(yǎng)。
 
7、DMEM/F12細胞培養(yǎng)基
Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的，現(xiàn)在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。由于營養(yǎng)成分豐富，且可以使用較少血清，故也常作為無血清培養(yǎng)基的基礎培養(yǎng)基。
 
8、M199細胞培養(yǎng)基
1950年Morgan等設計的具有確定化學成分的細胞培養(yǎng)液，即M-199。除BSS外，含有53種成分，為全面培養(yǎng)基，主要用于雞胚成纖維細胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細胞�，F(xiàn)廣泛用于病毒學、疫苗生產(chǎn)。
 
9、McCoy5A培養(yǎng)基
1959年MeCoy為肉瘤細胞設計，BSS＋40種成分�？芍С侄喾N（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長，除適于一般的原代細胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細胞的生長支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細胞、人淋巴細胞、HT-29、BHL-100等上皮細胞。
 
10、L15 細胞培養(yǎng)基
L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
至于選擇何種培養(yǎng)基并沒有一定的標準，有幾點建議可供參考：
(1)建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞首選的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻，或在購買細胞株時咨詢。也可以在一些生物公司的網(wǎng)站上搜索，選擇你感興趣的細胞類型，它就會彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等，有時還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟，很方便。
(2) 其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。
(3) 根據(jù)細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細胞株多選RPMI1640 。
(4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷，根據(jù)實驗結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。
 
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