定量PCR服務(wù)

熒光定量PCR服務(wù)

概述:

熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術(shù),它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。

原理:

PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步

前景:

實時熒光定量PCR的出現(xiàn),極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實現(xiàn)了絕對定量。多種檢測系統(tǒng)的出現(xiàn),使實驗的選擇性更強(qiáng)。自動化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測及其他各個領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識到,FQ-PCR技術(shù)在我國各個研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見,這就需要我國學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地推廣,以推動研究工作的快速發(fā)展。

服務(wù)項目及價格:

一般情況下,3周左右可完成實驗!若遇特殊原因,比如實驗材料降解,需要重新提供樣品或者總RNA需要重新提取;基因表達(dá)量較低,需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品等情況,周期會有所延長。

MiRNA定量PCR

MicroRNAs(miRNAs)是一類長度約20-24nt的非編碼單鏈RNA,在細(xì)胞增殖、凋亡、器官發(fā)生、發(fā)育、造血以及腫瘤發(fā)生等若干途徑中發(fā)揮重要作用。miRNA表達(dá)的定量分析是生物功能研究的基礎(chǔ),細(xì)胞、組織或血液中的miRNA的檢測有助于發(fā)現(xiàn)新的早期診斷和預(yù)測療效及患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。本公司提供優(yōu)質(zhì)的miRNA實時熒光定量PCR全套技術(shù)服務(wù)。

實驗流程

1.miRNA提取。

2.利用加尾法將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

3.隨機(jī)選擇一個樣品進(jìn)行預(yù)實驗,篩選引物,優(yōu)化程序。

4.熒光定量PCR正式試驗。

5.提交報告,原始Ct值。

服務(wù)內(nèi)容

1.相對定量:以U6 或5S rRNA為內(nèi)參,檢測樣本中相關(guān)miRNA的相對表達(dá)量。

2.絕對定量:以化學(xué)合成的miRNA成熟鏈為標(biāo)準(zhǔn)品,做5個或5個以上梯度點的稀釋后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品進(jìn)行相關(guān)miRNA絕對定量檢測。

樣品要求

最終產(chǎn)品

相應(yīng)引物(加尾法上游引物和通用引物;莖環(huán)法引物)及序列。

完整實驗報告。

服務(wù)說明

客戶需提供miRNA的準(zhǔn)確名稱